CpG寡脱氧核苷酸在急性白血病免疫治疗中的作用和机制研究

肿瘤疫苗治疗是目前最有希望彻底清除肿瘤微小残留病变、延长急性白血病治疗后缓解期的疗法，与适当的免疫佐剂联用更可提高其疗效。本研究拟自行设计C型CpG ODN新序列，通过体外刺激健康人外周血单个核细胞和小鼠脾细胞，根据细胞增殖、细胞因子分泌、细胞表面CD分子表达情况筛选出免疫活性最强的CpG ODN序列；将其作为肿瘤疫苗佐剂，对急性白血病小鼠进行主动免疫治疗，与IL-2、IFA传统佐剂对比疗效与不良反应；检测荷瘤小鼠细胞因子、NK细胞和特异性CTL杀伤活性、调节性T细胞比例；观察体内去除调节性T细胞措施与肿瘤疫苗治疗效果的关系，进一步研究以CpG ODN为佐剂的肿瘤疫苗免疫治疗急性白血病的机制。本研究将筛选出具有较强免疫活性的C型CpG ODN新序列，阐明其在白血病免疫治疗中的作用机制，改善瘤苗治疗效果，并可推广应用至其他血液恶性肿瘤和实体肿瘤。

急性白血病是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，易复发、耐药，死亡率高，目前治疗效果仍不满意。白血病的微小残留病灶可能是重要原因之一，而肿瘤疫苗治疗是目前最有希望彻底清除肿瘤微小残留病变、延长急性白血病治疗后缓解期的疗法，与适当的免疫佐剂联用更可提高其疗效。人工合成的具有免疫刺激活性的CpG ODN能够活化多种免疫效应细胞，增强其功能和细胞因子的分泌，增强抗原的加工提呈，诱导机体产生较强的体液免疫和细胞免疫，增强机体特异性和非特异性免疫反应。我们前期的实验已经证实，CpG ODN作为免疫佐剂，确能增强瘤苗诱发的机体抗肿瘤免疫反应的强度，持续抑制体内白血病细胞生长。本研究中，我们自行总结设计了37条C型CpG ODN新序列，通过体外刺激健康人外周血单个核细胞和小鼠脾细胞，根据细胞增殖、细胞因子分泌、细胞表面CD分子表达情况筛选出了4条具有较强免疫活性的序列；应用筛选出的新序列、经典CpG ODN序列1826和传统佐剂IFA+IL-2作为佐剂，联合灭活的肿瘤细胞疫苗对急性白血病小鼠进行了主动免疫治疗；观察了CpG ODN在体内外对Treg细胞的影响。最后，我们应用单抗阻断急性白血病模型小鼠体内Treg细胞后观察CpG ODN联合瘤苗免疫治疗的疗效，探讨了Treg细胞在白血病发病及免疫治疗中作用机制。机理研究证实，瘤苗发挥抗白血病作用并不是直接通过Treg细胞，而CpG ODN治疗可以通过下调Foxp3的表达来抑制CD4+FoxP3+Treg细胞的分化来发挥抗白血病作用。与同型IgG对照组相比，去除Treg能够明显增强荷瘤小鼠体内由瘤苗诱导出的特异性的抗白血病CTL反应，从而抑制了肿瘤的生长。以上结果表明将Treg作为靶点能够增强瘤苗介导的细胞免疫应答和抗肿瘤活性。. 通过项目的实施，我们筛选出了新的CpG ODN序列，并证实其具有良好的体内活性，能够延缓肿瘤生长，延长小鼠生存时间，减少肿瘤浸润，达到了预想的治疗效果。为进一步的实验研究和未来的临床应用提供实验材料和参考数据。并且CpG ODN在一定剂量下用药安全，无明显毒副作用，可作为一种新型的高效、低毒的免疫治疗药物，具有良好的临床应用前景。