黄芪多糖对缺血再灌注人心脏微血管内皮细胞凋亡及信号转导通路的影响

First，the microvascular endothelial cells are the earliest affected parts by ischemia and reperfusion, but microvascular endothelial cell apoptosis in ischemia-reperfusion injury did not attract enough attention. Second, there are obvious differences between the large vascular endothelial and microvascular endothelial cells in the biological activity and variety of substances reactive, microvascular endothelial cells in tissues and organs has significant heterogeneity also. However, due to the complicated difficulties of separation and culturing human microvascular endothelial cells and high cost, most domestic study used an alternative method.We concluded from previous work, one of the traditional Chinese medicine pathogenesis of ischemia reperfusion injury is deficiency of Qi. The human cardiac microvascular endothelial cells (HCMEC) are target cells, We will investigate the effects of Astragalus Polysaccharides on human cardiac microvascular endothelial cells (HCMEC) and observe cell apoptosis morphology and cell membrane changes. Using immunohistochemistry, Western blot analysis and RT-PCR, we will observe the changes of different apoptosis signal transduction pathway related genes and apoptosis-related protein expression and apoptosis execution factor.

首先，微血管内皮细胞是组织缺血及再灌注过程中最先波及的部位，但是缺血再灌注损伤时微血管内皮细胞凋亡却没有引起足够的重视。其次，大血管内皮与微血管内皮细胞在生物活性、对各种物质反应性等方面均存在着明显的不同，并且微血管内皮细胞具有显著的组织器官异质性。但是由于人微血管内皮细胞的分离、纯化、培养的繁杂困难及成本高昂，国内大多研究采用替代方法.针对以上问题，以人心脏微血管内皮细胞（HCMEC）为靶细胞，并根据前期工作中得出的缺血再灌注损伤中医病机之一是气虚的结论，研究黄芪多糖对缺氧再复氧人心脏微血管内皮细胞凋亡的影响，观察缺血再灌注HCMEC增值率、细胞形态学以及细胞膜成分的变化。采用免疫组化、Western blot、RT-PCR等技术和方法，观察凋亡不同信号转导途径相关基因和凋亡相关蛋白表达以及凋亡执行因子的作用。

在本研究中，黄芪多糖可以通过相关机制保护缺氧/复氧（缺血再灌注）损伤的人类心脏微血管内皮细胞(HCMEC)凋亡。在Na2S2O4 -诱导HCMECs 缺血再灌注损伤之前进行不同浓度的黄芪多糖预处理，然后用MTT和赫斯特化验分别测定细胞生存能力和细胞凋亡测定。Na2S2O4可以使 HCMECs的细胞生存力下降并增强细胞凋亡；然而，黄芪多糖通过抑制细胞凋亡可以提升细胞生存能力。此外，我们通过免疫印迹分析等方法检测细胞内活性氧(ROS)、Ca2+、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、磷脂酰肌醇3 -激酶(PI3K)-蛋白激酶B(蛋白激酶)、Bcl - 2、Bax、caspase - 3。与缺血再损伤HCMECs相比，活性氧的水平和Ca2 +，MDA和Bax、caspase - 3的活性升高。相比之下，NO、SOD、Bcl - 2和PI3K、AKT的蛋白表达水平表达降低了。然而，与缺血再灌注损伤组相比，APS可以使缺血再灌注损伤的伤害显著降低，特别是在更高的剂量组。当前的研究得出结论，APS通过减少活性氧Ca2 +，MDA、Bax、 caspase - 3的水平以及增加NO、SOD、Bcl - 2和PI3K、AKT 的蛋白表达水平保护Na2S2O4 -诱导HCMECs 缺血再灌注损伤，这些结果可能会提供一个APS在缺血再灌注损伤的临床应用和缺血再灌注损伤的新治疗策略。