从中枢敏化VGCC通道探讨温和灸调控内脏痛敏的研究

The central sensitive ion passage of PKC/VGCC/ Ca2+/Glu/NR2B is the key way that related to the onset and development of visceral hyperalgia. In order to discussing the central neural information transmission of visceral hyperalgia, to discussing the warm-moxibustion effect on the central-colon neural information transmission, discovering the scientific basis of analgesia effect of warm-moxibustion on the visceral hyperalgia, to revealing the scientific basis of analgesia effect of moxibustion, providing the experimental data and theory for the application and carring forward the moxibustion therapy, based on our previousely expremental outcome, established the visceral hyperalgia pain rats' model, seperated and cultured the dorsal horn neurons cell and the mast cell of them, the research aims at(1) exploring the PKC/VGCC/ Ca2+/Glu/NR2B ion passage's priming effect on visceral hyperalgia rats.(2)exploring the regulative effect of warm-moxibustion on PKC/VGCC/ Ca2+/Glu/NR2B ion passage by comparing the therapeutic effect of warm-moxibustion with the antagonist of N-VGCC(ziconotide)and/or the antagonist of NR2B(CP101606)on visceral hyperalgia rats by the modern experimental assay such as patch clamp recording technique,laser scanning confocal microscope and living cell working system.

中枢敏化PKC/VGCC/ Ca2+/Glu/NR2B离子通道是内脏痛敏发生、发展过程的关键因素。基于课题组前期研究，本项目拟以内脏痛敏IBS大鼠为研究载体，分离并培养其脊髓背根神经元和结肠肥大细胞，应用全细胞膜片钳、激光共聚焦显微技术、活细胞工作站等当今先进技术①探讨内脏痛敏IBS大鼠PKC/VGCC/Ca2+/Glu/NR2B离子通道在内脏痛敏启动效应中的作用机制。②通过比较温和灸与鞘内分别注射选择性N型VGCC拮抗剂齐考诺肽、NR2B拮抗剂CP101606对内脏痛敏IBS大鼠的治疗，探讨温和灸对中枢敏化PKC/VGCC/Ca2+/Glu/ NR2B离子通道的调控作用，从中枢探讨IBS内脏痛敏的神经信息传导机制及艾灸对中枢－肠神经信息交流的影响，揭示艾灸治疗IBS内脏痛敏的科学基础。以冀深入揭示艾灸镇痛的科学基础，为应用艾灸治疗痛证的推广，提供实验数据和理论依据。

中枢敏化PKC/VGCC/ Ca2+/Glu/NR2B离子通道是内脏痛敏发生、发展过程的关键因素。基于课题组前期研究，本项目采用目前国际公认的乳鼠结直肠球囊扩张刺激（CRD）的方法制备内脏痛敏IBS大鼠模型。观察温和灸天枢穴（双）、上巨虚穴（双）对内脏痛敏IBS大鼠脊髓PKCε、NR1和NR2B表达的影响，以及P2X3对NR1和NR2B的调节作用，从对PKCε、NR1、NR2B和P2X3调节的角度阐释艾灸治疗内脏痛敏IBS的作用机制。探讨内脏痛敏IBS大鼠PKC/VGCC/Ca2+/Glu/NR2B离子通道在内脏痛敏启动效应中的作用机制。通过比较温和灸与鞘内分别注射选择性N型VGCC拮抗剂齐考诺肽、NR2B拮抗剂CP101606对内脏痛敏IBS大鼠的治疗，探讨温和灸对中枢敏化PKC/VGCC/Ca2+/Glu/ NR2B离子通道的调控作用。通过比较温和灸与鞘内注射选择性P2X3受体拮抗剂A-317491对内脏痛敏IBS大鼠的治疗，探讨温和灸对中枢敏化环节中P2X3受体对PKC/VGCC/Ca2+/Glu/ NR2B离子通道的调控作用。实验结果显示，1）艾灸可显著降低内脏痛敏IBS大鼠AWR评分，改善结直肠球囊扩张刺激引起的IBS大鼠内脏痛敏状态。2）内脏痛敏IBS大鼠脊髓PKCε、NR1和NR2B表达异常增高，PKCε、NR1和NR2B可能在脊髓水平参与了IBS内脏痛敏的痛觉信号转导。3）艾灸可显著下调内脏痛敏IBS大鼠脊髓水平PKCε、NR1和NR2B的表达，改善内脏痛敏状态。通过降低内脏痛敏IBS大鼠脊髓PKCε、NR1和NR2B表达，且在这一过程中P2X3受体介导了NMDA受体功能的发挥，通过减弱内脏痛敏信号的转导，抑制中枢敏化的形成，可能是艾灸调节内脏痛敏状态的重要中枢机制之一。从中枢探讨IBS内脏痛敏的神经信息传导机制及艾灸对中枢－肠神经信息交流的影响，揭示艾灸治疗IBS内脏痛敏的科学基础。初步揭示了艾灸镇痛的科学基础，为应用艾灸治疗痛证的推广，提供实验数据和理论依据。