基于海马-HPA轴负反馈研究腹部推拿干预慢性应激所致CFS作用机制

Chronic stress is the main cause of chronic fatigue syndrome (CFS). The negative feedback of hippocampal-HPA axis is the basis of disease, and FKBPs-GR-NMDAR pathway is the key link to maintain balance. Applicants' previous studies found that abdominal Tuina can affect hippocampal nerve remodeling, but it is not clear how to modulate the negative feedback mechanism of hippocampus and HPA axis. Therefore, this study proposes the scientific hypothesis that abdominal Tuina uses the FKBPs-GR-NMDAR pathway to regulate the negative feedback mechanism of the hippocampal-HPA axis. The multiple stress method was used to replicate the CFS model, and the behavioral evaluation model was used as a measure of behavioral evaluation. Using MRI, electron microscopy and other techniques, observe the effect of abdominal Tuina on hippocampal volume, neuronal structure and morphology. Using RT-PCR, high-performance liquid, calcium imaging, immunohistochemistry and other techniques, detection of abdominal Tuina on FKBPs, GR, NMDAR and other mRNA expression, key pathway transmitter GLu, Ca2+ effect. Pathway antagonistic groups were set up, and radioimmunoassay was used to detect GC, GR and serum ACTH, CORT, and CRH hormones in the pathway antagonistic group. Taken together, the progression of CFS in the treatment of chronic stress caused by abdominal Tuina is thoroughly explained in layers.

慢性应激是慢性疲劳综合征(CFS)发生的主要原因，海马-HPA轴负反馈失衡是致病基础，FKBPs-GR-NMDAR通路是维持平衡关键环节。申请者前期研究发现腹部推拿可以影响海马神经重塑，但对其如何调控海马与HPA轴负反馈机制尚不明确。故本研究提出腹部推拿借助FKBPs-GR-NMDAR通路，调控海马-HPA轴负反馈机制的科学假说。采用多重应激法复制CFS模型，并以行为学等评价作为效应指标验证模型。以MRI、电镜等技术，观察腹部推拿对海马体积、神经元结构及形态影响。利用RT-PCR、高效液相、钙成像、免疫组化等技术，检测腹部推拿对海马FKBPs、GR、NMDAR等mRNA表达，通路关键递质GLu、Ca2+影响。设置通路拮抗组，应用放免、ELISA等技术检测GC、GR及血清内ACTH、CORT、CRH激素变化，验证通路关键作用。综合上述，层层递进完整阐释腹部推拿干预慢性应激所致CFS作用机制。

由于慢性疲劳综合征（Chronicfatiguesyndrome,CFS）在我们国家乃至世界上的发生率逐渐上升，对其发病机制及治疗手段的研究得到一致关注，腹部推拿治疗CFS疗效确切，但其治疗机制尚未明确。基于海马-HPA轴作为CFS的关键治疗环节及研究热点，本研究以CFS大鼠为模型，初步阐释腹部推拿治疗CFS的神经-内分泌作用机制，完善腹部推拿治疗CFS的理论来源，为临床提供有力的科学依据。本研究采用多重应激法复制CFS模型，并以行为学等评价作为效应指标验证模型。以MRI、电镜等技术，观察腹部推拿对海马体积、神经元结构及形态影响。利用RT-PCR、高效液相、钙成像、免疫组化等技术，检测腹部推拿对海马FKBPs、GR、NMDAR等mRNA表达，通路关键递质GLU、Ca2+影响。设置通路拮抗组，应用放免、ELISA等技术检测GC、GR及血清内ACTH、CORT、CRH激素变化，验证通路关键作用。研究结果显示，本项目采用冷水游泳法联合慢性束缚法能够较好建立CFS大鼠模型，同时研究中我们也证实造模后降低了海马中FKBP4的表达，提高了FKBP5的表达，减少了GR活性，使GC含量增高，刺激NMDAR表达增加，促使Ca2+内流，损伤海马神经元，破坏海马-HPA轴功能，影响激素分泌，形成负反馈机制的非良性循环；经腹部推拿后，可提高FKBP4的表达，降低FKBP5表达，使其对GR活性的拮抗作用保持平衡，进而提升GR活性，降低GC表达，减少NMDAR受体的激活，促使Ca2+内流减少，对海马神经元的损伤减少，细胞凋亡程度减弱，逐步恢复海马功能，调控海马-HPA轴负反馈中关键脏器和重要激素表达，最终形成良性循环，缓解疲劳及中枢神经紊乱诸症。本研究阐释了腹部推拿治疗CFS的作用机制将有助于提高其临床应用水平，对于未来深化腹部推拿基础研究，促进学科发展具有重要推动意义。