放射治疗联合溶瘤腺病毒治疗膀胱癌的机理和影响因素探讨

放疗联合生物治疗将有助于克服放疗抵抗和提高膀胱癌疗效。本研究通过重组腺病毒的构建、RNA干扰和干细胞分选等体内外研究方法，应用针对不同类型膀胱癌的组织特异性溶瘤腺病毒（BOV）联合放疗处理膀胱癌，观察不同剂量和时间放射线联合BOV和不同量BOV联合放疗的效果。探讨AR及CAR受体表达与疗效的关系。寻找提高疗效的分子靶点：通过调控Hexon、E1A和E4orf1的表达，有效提高BOV复制。检测DNA损伤与修复调节相关MRE11和Chk1、Chk2的表达，明确与疗效的关系；通过构建携带p21/waf-1 shRNA的BOV以及YB-1基因干扰，明确 p21/waf-1和YB-1基因对放疗合并BOV治疗中病毒复制和细胞杀伤的作用。分析放疗联合BOV对放疗抵抗的肿瘤干细胞的杀伤效应。建立提高放疗协同BOV治疗疗效的途径，为联合治疗策略提供理论依据，为临床研究奠定基础。

放疗联合生物治疗将有助于克服放疗抵抗和提高膀胱癌疗效。本研究通过重组腺病毒的构建、RNA干扰等体内外研究方法，应用针对不同类型膀胱癌的组织特异性溶瘤腺病毒联合放疗处理膀胱癌，观察不同剂量和时间放射线联合溶瘤病毒和不同量溶瘤病毒联合放疗的效果。从而寻找提高疗效的分子靶点并建立提高放疗协同溶瘤腺病毒治疗疗效的途径。研究结果表明我们构建的膀胱组织特异性溶瘤腺病毒在动物的一般健康状况及行为学表现、血液学中淋巴细胞百分比及血小板的数量、肝脏转氨酶水平、各主要脏器的脏器系数及病理学表现、溶瘤腺病毒基因及蛋白的表达水平上，未观察到明显毒性作用，相对安全。腺病毒联合放射治疗后，肿瘤细胞的凋亡增加且具有射线剂量依赖性和时间依赖性。Bax、细胞质中细胞色素C的增高，Bcl-2、线粒体中细胞色素C的降低，表明联合治疗组有可能是通过线粒体通路诱导膀胱癌细胞发生凋亡，从而发挥抑制肿瘤增殖效应。同时联合治疗组中自噬相关基因BECN、Atg-5 表达增高，DNA损伤通路相关蛋白如Mre11、γ-H2AX-ser139、Chk2-thr68的变化表明DNA损伤的增加，且联合治疗对细胞周期的阻滞作用明显增强。放疗联合溶瘤腺病毒治疗后，5637、BIU-87细胞表面CAR的表达升高，而EJ细胞表面CAR的表达并未增高；腺病毒的外壳六邻体蛋白和E1A的表达有明显升高，考虑放射治疗增加了腺病毒在肿瘤细胞内的复制能力，增强了腺病毒抗肿瘤的作用。我们的研究进一步明确了联合治疗的分子机制和关键的细胞受体，为进行临床I期试验提供了必需的理论依据。进一步拓展这一策略，可推动其它系统肿瘤的治疗，为肿瘤的治疗带来变革，具有非常诱人的前景。