再生障碍性贫血中TCR信号通路失调及其相关分子机制研究

T cells immune abnormality play a major role in the pathogenesis of aplastic anemia. Our previously research had shown that a series changes include TCR Vβ repertoire, recent thymic output function, component of TCR/CD3 complex and Cbl expression, which was a negative regulator of TCR signaling. In order to identify the molecular mechanisms of dysregulation of TCR in aplastic anemia, the expression of TCR signaling molecules and T cells function of different T cell subset will be analyzed in aplastic anemia. The influence of distribution and mutations of CD3ζ 3'-UTR splice variants and promoter on CD3ζ expression and regulative properties of the 3'-UTR of the CD3ζ which might contain microRNA (miRNA) binding sites will be analyzed. The molecular mechanisms of abnormal expression of Cbl will also be analyzed. By these investigations, we will further understand the feature of changed TCR signaling and regulative mechanisms in aplastic anemia and provide important research foundation about molecular target of immunoloregulation of abberent TCR signaling in aplastic anemia.

T细胞免疫异常在介导再生障碍性贫血（AA）发生中起关键作用。我们前期研究发现AA患者中T细胞受体（TCR） Vβ谱系、胸腺近期输出功能和TCR/CD3复合物组成分子以及调控TCR信号通路的负性调节因子Cbl等异常改变。为进一步明确AA中TCR信号通路失调的分子机制，本研究将通过分析AA患者不同T细胞亚群中TCR信号通路各分子的表达及其相应的T细胞功能改变；分析TCR信号通路近膜端重要信号分子-CD3ζ基因启动子和不同剪接体形式3'-端非编码区（3'-UTR）表达和突变对CD3ζ基因表达影响，并分析miRNA靶向结合3'-UTR调控CD3ζ基因表达的情况；分析Cbl异常表达的分子调控机制，系统明确AA中TCR信号通路改变以及相关调控机制的特点，探讨其可能在AA发病中的作用，为今后临床靶向分子免疫调节AA患者中异常TCR信号提供重要的研究基础。

T细胞免疫异常在介导再生障碍性贫血（AA）的发生起关键作用。基于本研究团队有关AA患者中TCRVβ谱系、胸腺近期输出功能变化等基础之上，以及目前国内外有关AA患者中TCR信号相关研究较少，尚未完全了解AA患者TCR信号特点及其作用。本研究主要分析AA患者TCR信号通路中参与调控T细胞活化的正向和负向调控分子CD28，CD137，HVEM，CD27，GITR，ICOS，OX40，CD70，CTLA-4的表达以及与T细胞活化阈值有关的Cbl-b表达情况；深入分析参与调控CD3ζ分子的相关调控因素，如靶向调控CD3ζ基因的miRNA的筛选和验证，CD3ζ基因3’端非编码区（3’-UTR）SNP/突变特点以及功能性SNP的验证。研究发现AA患者中信号分子CD28，CD27，OX40等正向调控T细胞火活化信号分子表达上调，而负向调控T细胞活化的CTLA-4以及与T细胞活化阈值有关的Cbl-b表达下调；不同形式的CD3ζ基因3’-UTR剪接体在不同病情程度的AA患者中分布以及对CD3ζ的表达调控存在差异， 健康人外周血中均可以同时检测到WT型和AS型2种CD3ζ 3’-UTR异构体， AA患者WT+AS+CD3ζ 3′-UTR异构体出现频率与健康人相比显著下降，而WT+AS-CD3ζ 3′-UTR和WT-AS+CD3ζ 3′-UTR异构体的分布特点显著高于健康人。SAA和NSAA患者中，尽管三种不同分布特点的异构体出现频率无明显统计学差异，但WT+AS+CD3ζ 3′-UTR的在NSAA患者高于SAA患者，WT-AS+CD3ζ 3′-UTR的SAA患者高于NSAA患者。进一步分为WT+AS+，WT-AS+和WT+AS- 亚组。AA和NSAA患者中，SAA患者中WT-AS+组CD3ζ基因表达量显著高于WT+AS+组和WT+AS-组；miRNA-214靶向调控CD3ζ表达，且其在AA患者中表达上调可能通过作用于A20基因影响T细胞活化；CD3ζ基因3’-UTR区域SNP/突变的检出率、分布以及类型异于健康人以及1184 C>G(rs3738212)在AA患者中的高频出现，并且与疾病不良预后有一定关系。研究结果为全面了解AA患者中异常TCR信号，尤其是正向调控T细胞活化的信号特点提供基础资料。同时，也从不同分子调控机制层面解释AA患者TCR信号差异变化的可能原因，并结合临床为今后更为