职业苯接触和慢性苯中毒人群细胞免疫模式差异变化的研究

在课题组前期研究发现职业接苯后影响机体外周血TCRVα和Vβ亚家族T细胞分布和克隆性以及胸腺近期输出功能等基础上，进一步了解苯代谢相关酶多态性与TCR谱系变化的关系和职业接苯后对T细胞相关转录因子的影响。利用实时定量PCR、RT-PCR和基因扫描等方法分析参与苯代谢相关酶多态性与TCR谱系变化、克隆性增殖T细胞的性质的关系以及T细胞特异性转录因子（T-bet和GATA-3）表达情况，了解职业接苯人群细胞免疫异常改变的特点；了解职业接苯人群细胞免疫状态差异与慢性苯中毒发生的相关性，率先在国内外补充苯代谢酶多态性与职业接苯人群各T细胞亚群中TCR谱系变化的相关性以及T-bet和GATA-3基因与慢性苯中毒发生发展相关性的研究内容，为进一步了解职业接苯后慢性苯中毒发生的免疫机制以及提出合理有效的检测和预防措施提供重要的研究基础。

本研究主要目的是分析职业苯接触和慢性苯中毒工人样本中T细胞免疫功能尤其是TCR受体及其信号传导通路中的异常改变，发现职业苯接触人群中细胞免疫功能缺陷的原因，并进一步深入研究不同职业接苯工人中T细胞免疫功能的差异改变与慢性苯中毒发生发展的关系。研究共收集广州地区某制漆厂和某涂料厂职业苯接触工人外周血标本640例，其中部分标本系连续1年动态跟踪收集。目前已完成640例样本T细胞亚群分析和胸腺输出功能的检测，并对部分职业苯接触和前期收集的慢性苯中毒工人外周血标本分析TCR信号通路近膜端信号分子CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ和FcεRIγ以及Th1/ Th2细胞特异性转录因子GATA-3和T-bet基因表达情况，发现在职业苯接触和慢性苯中毒工人中T细胞免疫存在差异改变，下一步将通过体外细胞实验深入分析这种差异改变的分子机制。同时，依托与我们长期合作的广东省和广州市职业病防治医院的合作，我们还将TCR的系列研究引入到职业铅、汞和三氯乙烯接触工人T细胞免疫功能改变的研究中。研究发现职业铅接触和铅中毒工人中同样存在免疫模式的差异改变，其中尤其以TCR/CD3复合物中CD3ζ最为显著，因此对涉及调节CD3ζ表达的因素进行了系列研究，发现职业铅接触工人中ELF、CD3ζ基因3′-UTR以及CD3ζ基因启动子区域的突变可能均参与了对CD3ζ基因表达的调控。另外，还对职业汞接触、三氯乙烯药疹样皮炎工人以及原发再生障碍性贫血患者的TCR谱系、TCR/CD3复合物表达等情况进行了初步研究。.总之，本项目率先将TCR相关的系列指标应用于职业接触有毒有害物后机体T细胞损伤的研究中，该研究发现在职业苯，铅接触和中毒工人中存在免疫模式的差异改变，这为进一步了解职业苯中毒和铅中毒发生的免疫机制以及提出合理有效的检测和预防措施提供了基础研究资料。本课题经过3年的实施，已经完成了研究任务，部分前期的研究成果已经发表了论文11（SCI收录2篇），主要的研究成果参加了国际学术会议交流论文2篇，正在准备投稿论文多篇，申报发明专利并已授权1项。