无载体、无选择标记基因的转基因耐贮藏河套蜜瓜的培育

利用植物双元表达载体pPZP100和pGA643,以及申请者自行克隆的甜瓜ACC合成酶基因cDNA、ACC氧化酶基因cDNA、果实特异性表达黄瓜素基因启动子，分别构建4种表达载体，用限制性内切酶切割，电泳分离和制备无载体、无选择标记基因、只含有启动子、目的基因、终止子和LB/RB序列的目的DNA片段。应用花粉管通道法将目的DNA片段导入内蒙古特产的优良甜瓜品种河套蜜瓜，获得T0代转化种子，播种于田间，进行自交，根据分子检测结果和转基因果实的耐贮藏表型筛选转基因植株，收集耐贮藏果实，采集T1代种子，播种于田间，自交授粉，继续评价果实耐贮性，并根据分子检测和表型分离情况，选择纯合株系，采集T2代种子，进行外源基因拷贝数测定。为进一步培育无载体、无选择标记基因的更具有生物安全性的转基因耐贮藏河套蜜瓜新品种创造条件，可见本项研究具有重要应用前景。