基于质谱联用和激光显微切割技术的瓜馥木药用部位及安全性评价研究

Fissistigma oldhamii (Hemsl.) Merr. are mainly used as roots, with the effect of Qufengchushi and Huoxuehuayu in documents.However, it is called Xiangteng in Hakka region,using the overground parts as a famous folk herb. There are obvious differences in the literature, pending evaluation and research. And the studies of chemical composition show that there are some renal toxic components in the herb, including Aristololactam A II, Aristololactam A III a, Aristololactam B II,Aristololactam B III,Aristololactam F II and Aristololactam F I. we will:1. Cut and separate the differet parts of the organization and cells in the roots, stems and leaves, such as the special secretory cells in the cortex and the non glandular hairs on the skin with some objects inside, based on the Laser capture microdissection technology.2. Analysis of the distribution of the chemical constituents in the tissues and cells by LC-MS and GC-MS.3. identificate the distribution of toxic Aristololactam components (such as Aristololactam components) and active ingredients (such as alkaloids) in the microstructure position. Finally, we will establish a comprehensive quality evaluation system of Fissistigma oldhamii to ensure its efficacy and safety.

具祛风除湿、活血止痛作用的瓜馥木，文献记载药用部位为根。但客家地区称其为香藤，以地上茎叶入药，与文献存明显差异。孰优孰劣？有待评价研究。其次，化学成分研究显示瓜馥木含有马兜铃内酰胺AⅡ、马兜铃内酰胺AⅢa、马兜铃内酰胺BⅡ、马兜铃内酰胺BⅢ、马兜铃内酰胺FⅡ、马兜铃内酰胺FⅠ等，该类化合物具明显肾毒性，有必要对其进行深入研究。本项目拟采用激光显微切割技术和液相色谱-质谱联用、气相色谱-质谱联用技术相结合的方法，切割分离瓜馥木根、茎、叶中各类组织细胞，如特殊的皮层分泌细胞和表皮上具油状内含物的非腺毛（非腺毛一般无分泌功能）；对各组织细胞进行LC-MS及GC-MS分析，总结瓜馥木中化学成分种类，及其在组织细胞中的定量和定位；尤其是明确有毒成分马兜铃内酰胺类化合物及其主要有效成分生物碱类化合物的存在规律。意在评价不同药用部位优劣，建立瓜馥木安全有效的评价体系，为临床安全应用提供科学理论依据。

本项目基于质谱联用技术对瓜馥木不同部位（根、茎、叶、虫瘿、果实）进行成分比较研究，同时结合激光显微切割技术分离瓜馥木主要药用部位（根、茎、叶）中各类组织细胞，如特殊的皮层分泌细胞和表皮上具油状内含物的非腺毛（非腺毛一般无分泌功能），对各组织细胞进行质谱检测，分析瓜馥木中化学成分种类及其在组织细胞中的定量和定位。结果显示GC-MS共鉴定出41个挥发性成分，包括各部位共有成分19个和差异性成分22个, 如Camphene和Valencen在根中含量最高，trans-2-Hexenal、β-Caryophyllene和α- Caryophyllene几乎只存在于叶子中等，β-Ocimene，Linalool和α-Terpineol在茎中含量最高。LC-MS共鉴定114个成分，包括各部位共有成分68个和差异分布成分46个，叶中检测到93个成分，果实中97个成分，根中100个成分，茎中89个成分，虫瘿中91个成分。其中根茎叶的特有成分分别为4、1和3个。各组织细胞中共定位了99个成分，检测到各细胞共有成分5个，即Haplotubinone、Norannuradhapurine、1,2-Dihydrotanshinqu-inone、Xylopine和Oxoxylopine。其余各成分在不同组织细胞中差异性分布，如根的特异性成分5,6,7-Trimethoxyflavone和Norcepharadione B分布在其木质部细胞中，Norfissilandione在根的周皮中；茎的特异性成分Fissicesine则仅在其周皮中；叶特有成分Isoquercitrin仅分布在栅栏组织和非腺毛中。值得关注的是，有毒成分马兜铃内酰胺被检测到10种，根和茎中的种类最多，但茎中含量均较高，其中9种马兜铃内酰胺在茎中相对含量超50%，尤其是Enterocarpam I、Aristolactam BII、G I和Piperolactam C在茎中的含量超80%。其次这10种马兜铃内酰胺都主要分布在根、茎的周皮中。研究结论明确了瓜馥木主要有效成分和有毒成分马兜铃内酰胺类化合物的体内分布规律，并基于成分分布评价了不同药用部位药用优劣，为临床安全应用提供科学理论依据。