miR-132在TLR2信号通路诱导系统性红斑狼疮Treg/Th17细胞失衡中的作用及机制研究

The imbalance between Treg/Th17 cells plays a critical role in the pathogenesis of SLE and the underlying mechanism remains one of the hottest issues of SLE research. In previous studies, we found that TLR2 stimulation of CD4+T cells from SLE patients could elevate the acetylation level of histone 4 (H4) in the promoter regions of IL-17a and IL-17f, promote the secretion of these inflammatory cytokines and inhibit the transcription of Foxp3, which induced the imbalance between Treg/Th17 cells leading to the development of SLE. However, how TLR2 signaling pathway deviates the balance between Treg/Th17 cells remains to be determined. MicroRNA plays an important role in the differentiation of immune cells. Our previous studies showed that ligation of TLR2 increased the expression of miR-132 and decreased the expression of its target, histone deacetylase sirt1, in lupus CD4+T cells, which indicates a role of miR-132 in the TLR2 induction of Treg/Th17 imbalance. Therefore, our project aims to investigate the role and underlying mechanisms of miR-132 in the TLR2 induction of Treg/Th17 imbalance, in vitro and in vivo. Furthermore, we will explore the therapeutic potential of miR-132 in SLE through mice experiments. These studies will help demonstrate a novel mechanism in SLE pathogenesis and provide new, effective therapeutic targets.

Treg/Th17细胞失衡在系统性红斑狼疮（SLE）的发病中起着关键作用，导致这一现象的机制一直是SLE的研究热点之一。我们前期研究证明，TLR2激活后可上调IL-17a、IL-17f启动子区组蛋白H4乙酰化水平，促进IL-17a、IL-17f的分泌，抑制Foxp3的表达，从而引起Treg/Th17细胞失衡。进一步研究发现，TLR2激活后可引起SLE患者CD4+T细胞miR-132过表达及其靶基因组蛋白去乙酰化酶sirt1表达下调。我们推测，TLR2激活可通过诱导miR-132过表达，抑制某些特定的miR-132靶基因表达，从而促进Th17相关炎症因子转录，引起Treg/Th17细胞失衡，参与SLE发病机制。因此，本项目拟通过细胞与体内动物实验验证这一假设，并探讨抑制外周血miR-132的表达能否减轻狼疮小鼠的狼疮样症状和炎症反应。本研究将有助于进一步揭示SLE的发病机制并探寻治疗新靶点。

系统性红斑狼疮（SLE）是一种重大复杂性自身免疫疾病，累及全身多个器官、系统，从而导致患者表现出复杂多变的临床症状。其发病机制目尚不清楚。近年来研究发现，T淋巴细胞过度活化、调节性T细胞（Treg）与辅助性T细胞17（Th17）细胞亚群失平衡在系统性红斑狼疮的发病中发挥了重要作用。但其具体机制尚不明确。本项目研究发现：激活TLR2信号通路可诱导SLE患者外周血CD4+T细胞中 IL-17a的表达水平显著升高， Foxp3的表达水平下降，Th17细胞比例上调，Treg细胞比例下降，转录因子stat3、RORrt的表达水平升高；同时，MiR-132表达上调，其靶基因组蛋白去乙酰化酶Sirt1的表达水平下降。激活TLR2后，IL-17a启动子区H4组蛋白乙酰化水平升高，Sirt1结合水平下降。进一步研究发现，将体外培养的SLE患者外周血CD4+T细胞分为两组，分别转染miR-132 inhibitor和inhibitor control，5小时后再激活TLR2，与对照组相比，转染miR-132 inhibitor后，CD4+T细胞中MiR-132表达下降，Sirt1表达水平升高，IL-17a表达水平下调并且IL-17a启动子区组蛋白乙酰化水平降低。但是，在MRL/MpJ-Tnfrsf6lpr/J 狼疮模型小鼠体内抑制外周血miR-132的表达，对小鼠狼疮样症状、外周血清中IL-17a、IL-17f的浓度、抗-dsDNA抗体水平和尿蛋白浓度无明显改善。本项目研究结果证明，TLR2激活后可通过上调MiR-132的表达水平下调其靶基因组蛋白去乙酰化酶Sirt1的表达水平，从而上调IL-17a启动子区H4组蛋白乙酰化水平，促进IL-17a的表达，同时，TLR2激活后可上调转录因子stat3、RORrt的表达水平，导致Th17/Treg细胞比例失衡，参与SLE发病机制。然而，通过尾静脉注射miR-132 antagomir抑制MRL/MpJ-Tnfrsf6lpr/J 狼疮模型小鼠体内miR-132的表达，不能有效预防或改善小鼠狼疮样症状，说明生物体内机制复杂，整体抑制外周血细胞中miR-132的表达不能起到关键性保护作用。本项目研究结果进一步揭示了系统性红斑狼疮的发病机制，为进一步探索SLE的治疗方法提供了新的理论依据。