肾综合征出血热（HFRS）血小板减少免疫学新机制的研究

Thrombocytopenia is a severe pathological injury in hemorrhagic fever with renal syndrome(HFRS). However, the mechanism of thrombocytopenia is still unknown. The transbilayer movement of phosphatidylserine（PS） from the inner to the outer leaflet of the membrane bilayer is a marker for apoptotic cells, while it appears both on activated platelets and apoptotic platelets. In our previous experiments, we found that the percentage of PS-positive platelets in plasma of HFRS patients had been increased in acute stage,in which the percentage of activited platelets was over 50%. The milk fat globule-EGF factor 8( MFG-E8) ,which binds PS , both in plasma and on monocytes, αvβ3 and αvβ5(receptors for MFG-E8) on monocytes were also increased, suggested that monocytes may play important role in thrombocytopenia in HFRS via phagocytosis of not only apoptotic platelets, but also activated platelets. In the present study, based on the expression profiles of PS on activited platelets and MFG-E8 ,αvβ3 and αvβ5 on monocytes in HFRS patients, we will set up the activation assay of platelets in vitro to clarify the mechanisms for the monocytes phagocytosis of PS-positive platelets through MFG-E8 and its receptors, and the mechanisms for the up-regulation of MFG-E8 after HTNV infection. These studies may give the new insights for thrombocytopenia in hemorrhagic fever caused by HTNV and other virus infection.

血小板减少症是肾综合征出血热（HFRS）主要病理损伤之一，但机制不清。磷脂酰丝氨酸（PS）外翻是细胞凋亡标志之一，而血小板在活化和凋亡时均可出现PS外翻。我们最近研究表明：HFRS患者急性期PS+血小板百分率明显升高，其中活化血小板占50%以上；血浆中结合PS的调理吞噬素乳脂肪球表皮生长因子8（MFG-E8）水平增加；单核细胞（Mo）产生MFG-E8及其受体αvβ3 和αvβ5表达均明显升高。提示Mo通过MFG-E8与相应受体结合，不仅吞噬凋亡血小板，而且吞噬PS+活化血小板，可能是HFRS血小板减少的重要机制。本研究在搞清HFRS患者活化血小板PS表达规律和MFG-E8及其受体在Mo表达规律基础上，利用体外血小板活化模型，阐明Mo通过MFG-E8及其受体吞噬PS+血小板的效应机制；探讨HTNV感染时MFG-E8表达升高的分子机制，为HFRS及其他病毒性出血热血小板减少机制研究提供新思路。

本研究主要阐明了汉滩病毒感染引起的肾综合征出血热 (hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)血小板减少的免疫学新机制。研究发现，在HFRS患者早期血小板上磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine, PS）表达与恢复期和正常人相比有明显升高，并且大部分PS+血小板同时表达血小板活化标记CD62P，说明活化的血小板表达PS。提示，活化血小板具有被凋亡调理吞噬素介导吞噬清除的分子基础。进一步研究发现，HFRS患者急性期血浆中凋亡调理吞噬素乳脂肪球表皮生长因子8（milk fat globule epidermal growth factor 8, MFGE-8)的水平也较恢复期和正常人明显升高，且与血小板计数负相关。同时， HFRS患者急性期外周血单核细胞上MFG-E8及其受体αvβ3 /αvβ5表达均明显高于恢复期和正常人，且MFG-E8在单核细胞中间群和非经典群升高最为明显。在体外患者单核细胞吞噬凝血酶活化血小板体系中，加入MFG-E8可将吞噬率提高近2倍，而当封闭血小板上PS或单核细胞上αvβ3/αvβ5可明显抑制单核细胞对活化血小板的吞噬，且αvβ3/αvβ5中和抗体具有协同作用。上述研究表明，MFG-E8参与单核细胞对PS+活化血小板的吞噬，是HFRS患者早期血小板减少原因之一。.进一步研究发现，HFRS患者急性期血浆中趋化因子 CX3CL1较恢复期和正常人明显增高且与该病严重程度正相关；急性期CX3CR1受体在单核细胞，特别是中间群和非经典亚群上的表达较恢复期和正常人均明显升高，可能参与调控MFG-E8表达。.项目计划之外发现，不同单核细胞亚群CD31分子表达密度随HFRS病程和病情发生变化，可能影响单核细胞、血小板及与内皮细胞的黏附。 HFRS患者早期中性粒细胞产生的髓过氧化物酶明显增高，且与血小板计数负相关；而恢复期升高的中性粒细胞-血小板聚集体的功能，则有待进一步研究。另外，HFRS患者体内肝素诱导的血小板减少症抗体阳性比例和滴度均明显高于正常人，虽未与血小板减少直接相关，但其是HFRS肝素治疗潜在危险因素之一。.上述研究揭示了单核细胞和中性粒细胞等参与HFRS血小板减少的免疫学新机制，亦可能为其他合并血小板减少的病毒性疾病相关研究提供借鉴，有重要的理论意义及潜在临床应用价值。