TLR2上调IL-10分泌在缺氧缺血性脑损伤中的作用及机制研究

Hypoxic ischemic brain damage (HIBD) is the high incidence of neurological disease in neonatal period, which therapeutic method and prognosis is limited now. HIBD is one of the main causes of neurological disability in children, and even seriously decreases the quality of children's life. Toll-like receptors (TLRs) are the bridge of natural immunity and acquired immunity. A large number of studies have shown that immune response mediated by TLRs plays an important role in non-infectious diseases of the central nervous system, especially the role of TLR2. In the previous study, we found that the expression levels of TLR2 and NFкB were up-regulated and the secretion of IL-10 was increased during the nerve injury. Therefore, we speculated that TLR2/IL-10 signaling pathway mediated the regulation of inflammatory reactions after HIBD. This project will further study using the HIBD model in vivo and OGD model in vitro. Meanwhile,we hope to clarify the biological function of IL-10 during HIBD and confirm the key molecular of NFкB in the TLR2→IL-10 signaling pathway through siRNA technology, agonist and blocking agent. It aims to reveal a new signal transduction pathway of TLR2/NFкB/IL-10 during the nervous system damage, and to provide a new insight for clinical treatment of neonatal HIBD.

缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是新生儿高发神经性疾病，治疗手段有限且预后不良，是导致儿童神经系统伤残的主要原因之一，严重影响儿童的生活质量。Toll样受体（TLRs）是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁，大量研究显示，在中枢神经系统非感染性疾病中，由TLRs介导的免疫应答起着重要作用，其中TLR2的作用尤其关键。本课题在前期研究中发现神经损伤过程中TLR2、NFкB的表达上调，同时伴随着IL-10的分泌增多，因此推测TLR2/IL-10介导HIBD后续炎症反应的调节。本项目拟从体内外两部分深入研究，将HIBD动物模型和OGD损伤神经细胞模型相结合，采用siRNA、激动剂和阻断剂等技术进行研究，在阐明IL-10在HIBD损伤中的生物学作用的同时，拟证实NFкB是TLR2→IL-10信号的关键分子，以期发现神经系统损伤过程中TLR2/NFкB/IL-10新的信号通路，为临床治疗HIBD提供新的认识。

缺氧缺血性脑损伤（HIBD）是新生儿高发神经性疾病，是导致儿童神经系统伤残的主要原因之一。Toll样受体（TLRs）是链接天然免疫和获得性免疫的桥梁，有研究表明TLRs在中枢神经系统非感染性疾病中发挥非常重要的作用。我们的研究发现HIBD损伤诱导脑组织中TLR2、IL-10的表达水平上调；随着Pam3CSK4进一步上调TLR2表达水平，HIBD大鼠的学习记忆功能进一步下降，NFkB、Bax和IL-10表达水平也随之上升。体外利用Pam3CSK4及siTLR2的研究发现，MSCs共培养可下调OGD损伤PC12细胞中的TLR2/NFkB信号通路，抑制Bax表达及IL-10的分泌。提示HIBD损伤过程中脑组织中TLR2与IL-10存在密切的关系，而MSCs移植可改变TLR2/IL-10的变化。进一步的研究发现，海马内注射AAV-IL-10- shRNA可显著抑制HIBD大鼠的学习记忆功能，降低脑片LTP。体外OGD损伤可诱导原代星形胶质细胞TLR2/NFkB表达水平，促进IL-10的分泌；但原代神经元内IL-10并无明显差异。重组IL-10处理可促进OGD损伤的神经元凋亡减少，胞内钙活性增加；但并不改变OGD损伤的星形胶质细胞凋亡数。其分子机制是p-NFκB p65可与IL-10基因启动子区的-1700/-1500区域结合，上调OGD损伤后IL-10的表达水平。 提示HIBD诱导星形胶质细胞分泌IL-10，促进损伤神经元的抗凋亡作用。因此TLR2/IL-10可作为HIBD治疗的一个新的作用靶点。.目前该项目已发表SCI学术论文3篇，参加全国性学术会议4人次，获得重庆市卫生和计划生育委员会医学成果二等奖1项，培养毕业研究生3名，其中1名博士研究生，2名硕士研究生。