HBV特异性CXCR5+CD8+T淋巴细胞介导的免疫应答在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用研究

Since specific immune response is one of the important mechanisms of the body's immune response after chronic hepatitis B virus infection, and the existing basic immunology research is still not completely clarify the specificity immune response mechanism of hepatitis B virus removal and HBeAg/HBsAg seroconversion, which hinders the clinical cure of chronic hepatitis B patients. Recent studies have found a kind of CD8+T lymphocytes which expression of chemokine CXCR5. This kind of CXCR5+CD8+T cells have both the killing functions of cytotoxic T lymphocyte, and function of promoting the humoral immune response, similar to Tfh cells. As reported that they play an important role in the process of the immune response in patients with chronic LCMV or HIV infection and nasal polyp, while there is no research reports about CXCR5+CD8+T cells in chronic hepatitis B. This project is aimed to discuss the HBV specific CXCR5+CD8+T cell-mediated specific cellular immunity and humoral immunity response level in the chronic HBV transfection mouse model and chronic hepatitis B patients, so as to provide a new immunotherapy target in controlling of hepatitis B virus replication and in reaching the standard of clinical cure of chronic hepatitis B.

特异性免疫应答是慢性乙肝病毒感染后机体免疫应答的重要机制之一，现有的基础免疫学研究尚不能完全阐明乙肝病毒清除及HBeAg/ HBsAg血清转换的特异性免疫应答机制，阻碍了慢性乙型肝炎患者追求临床治愈的目标。近期有研究发现了一种表达趋化因子CXCR5的CD8+T淋巴细胞，其既具有细胞毒性T淋巴细胞的杀伤功能，又具有类似Tfh细胞的促进体液免疫应答的功能，在慢性LCMV、HIV感染及鼻息肉患者的免疫应答过程中起重要作用。目前国内外尚无CXCR5+CD8+T淋巴细胞在慢性乙型肝炎方面的研究报道。本项目拟以CXCR5+CD8+T淋巴细胞为中心，以慢性肝病毒转染小鼠及慢性乙肝病毒感染患者为研究对象，进一步探讨慢性乙肝病毒感染后CXCR5+CD8+T淋巴细胞介导的机体特异性细胞免疫及体液免疫应答水平，试图阐明慢性乙型肝炎患者病毒清除及HBeAg/ HBsAg血清转换的免疫反应机制，为进一步寻找控制乙肝病毒复制、达到慢性乙型肝炎临床治愈标准提供新的免疫治疗靶位。

HBV 特异性CD8+T淋巴细胞的耗竭是导致HBV感染慢性化的主要原因之一。CXCR5+CD8+T淋巴细胞已被证明在多种慢性病毒（LCMV、HIV等）感染中的发挥抗病毒作用，但在HBV感染时，CXCR5+CD8+T细胞发挥的作用及机制需进一步阐明。运用高压水动力法分别将 pcDNA3.1-HBV1.3 质粒和pAAV-HBV1.2 质粒通过尾静脉注射到 C57BL/6J(B6)小鼠中以建立急、慢性 HBV 转染小鼠模型，并纳入了CHB 患者，通过流式细胞术检测急、慢性HBV转染小鼠脾脏及CHB患者外周血中目的细胞的频数、表型和功能。结果表明无论是急、慢性 HBV 转染小鼠脾脏及 CHB 患者外周血中均检测到 HBV 特异性 CXCR5+CD8+T细胞表达。与 HBV 特异性CXCR5-CD8+ T 细胞相比，急、慢性 HBV 转染小鼠脾脏中 HBV 特异性 CXCR5+CD8+ Tfc 细胞表达的 PD-1 和 Tim-3 更高，但经 HBc 93-100 抗原肽刺激后分泌 IFN-γ 和 TNF-α 的能力更强。同时急、慢性 HBV 转染小鼠脾脏中 HBV 特异性 CXCR5+CD8+ Tfc 细胞表面表达 ICOS和 CD40L，且经 HBc 93-100 抗原肽刺激后分泌 IL-21。在CHB患者中，与 CXCR5-CD8+ T 细胞相比，外周血中 CXCR5+CD8+ Tfc 细胞表达抑制性分子PD-1和 Tim-3 更高，同时CXCR5+CD8+ T细胞表面表达更高的ICOS和CD40L，在PMA刺激后，分泌IL-2、IL-21的比例更高，但分泌颗粒酶B的能力较低。同时在HBeAg阴性，低表面抗原，低HBV DNA状态下，CXCR5+CD8+T细胞的频数较高。通过比较PD-1+和PD-1-两组间CXCR5+CD8+T细胞和CXCR5-CD8+T细胞间细胞因子的分泌能力，发现表达PD-1的亚群分泌IFN-γ，TNF-α，IL-2，IL-21的能力较强。以上结果表明，HBV特异性CXCR5+CD8+T发挥抗HBV作用，并可能参与抗HBV的体液免疫应答。表达PD-1的CXCR5+CD8+T细胞和CXCR5-CD8+T细胞在HBV感染中并非呈现功能耗竭的状态。