宣肺通腑化瘀法经UPP降解肺纤维化大鼠Smad信号通路蛋白的机制研究

近年来肆虐全球的传染性非典型肺炎、人禽流感和甲型H1N1流感，属于中医"温病"范畴，在其病理演变过程中均可出现不同程度的肺纤维化。肺纤维化死亡率、致残率极高。西医缺乏特异有效的治疗手段。因此，中医药抗肺纤维化治疗有其应用前景。宣肺通腑法是清朝温病名医吴鞠通用来治疗痰涎壅盛、潮热便秘的有效治法，当代中医在该法基础上合用活血化瘀法(简称宣肺通腑化瘀法)干预肺纤维化取得良效。我们前期实验研究发现宣肺通腑化瘀法可以抑制TGF-β1蛋白表达，但是作用机制尚不清楚。已知Smads是近年来发现的最重要的一条TGF-β1下游信号通路。因此，我们在既往研究基础上，从UPP对Smad蛋白降解作用作为切入点，进一步深入探讨宣肺通腑化瘀法防治肺纤维化的作用机制。具有科学性和创新性，有助于提高宣肺通腑化瘀法在肺纤维化防治中的应用价值。

目的 探讨UPP、TGFβ-Smad在肺纤维化大鼠肺组织中的变化及宣肺通腑化瘀法、宣肺化瘀法、通腑化瘀法、活血化瘀法对其的影响。方法 将70只雄性SPF级Wistar大鼠随机分为7组，阴性对照组(A组)、肺纤维化模型组(B组)、醋酸泼尼松阳性对照组(简称泼尼松组，C组)、宣肺化瘀法组(D组)、通腑化瘀法组(E组)、活血化瘀法组(F组)、宣肺通腑化瘀法组(G组)，每组10只。经鼻滴入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型。C、D、E、F、G组于制模8h内开始分别灌胃醋酸泼尼松或中药组方，每日1次。阴性对照组及模型组给予等体积生理盐水。于制模28d处死所有大鼠，通过HE染色、天狼星红染色来鉴定模型；免疫组织化学法测定肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad4、Smad7蛋白表达；实时荧光定量PCR测定肺组织TGFβR2、Smad2、Smad4、Smad7、Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2、NF-κB1、NF-κBP65 mRNA表达；Western blotting检测肺组织P-NFκBP65、TGFβR2、P-Smad2、Ub、PSMC2、Smurf1、Smurf2蛋白表达。结果 与模型组相比，Smad7 mRNA和蛋白表达水平显著升高，除E组Smad7 mRNA外均P<0.05；除E组外Smad4阳染细胞明显减少P<0.01。在此基础上，G组Ub蛋白表达明显增加，Smurf2 mRNA和蛋白表达均增加。D组TGFβR2、P-Smad2蛋白表达水平降低，Ub蛋白表达明显增加，Smurf2 mRNA和蛋白表达均增加。结论 四种中医治法都能通过上调Smad7蛋白表达阻止α-SMA和胶原纤维形成，从而减缓大鼠肺纤维化的发病。除通腑化瘀法外各治法还能下调Smad4蛋白表达。在此基础上，宣肺通腑化瘀法还能上调Ub、Smurf2蛋白表达水平。尤其值得关注的是，宣肺化瘀法既能通过直接调控TGFβ-Smad通路，又能经Ub-Smurf2通路降解TGFβR2、Smad2，从而阻断TGFβ-Smad信号转导通路，是其防治肺纤维化的重要机制之一。