血清2型蓝舌病病毒毒力基因的筛选与鉴定

Bluetongue (BT), caused by bluetongue virus (BTV), is a very important infectious disease of ruminants. BT is classed as notifiable disease by World Organisation for Animal Health (OIE) and group first disease in China. Study on BTV virulence genes has important significance on the prevention of BTV. In our project, it should be applied to screen BTV-2 virulence genes that reverse genetic system of BTV-16 (NB96/16), cell-based assay, BTV-16 (NB96/16) sheep and sucking mice animal model. Recombinant BTV-16 contain Segment 2, 5 or 10 gene of BTV-2 should be constructed respectively, and virulence variation of the recombinant virus on cell and animal model should be detect, then analyze the relationship of the introduced gene and BTV-2 virulence. After that, the virulence genes of virulent and avirulent BTV-2 should be compared, the key amino acid site should be identified according the method mention above. This project can provide certain reference for attenuate vaccine development and risk assessment of emergence of recombinant BTV cause by segment exchange.

蓝舌病是由蓝舌病病毒引起反刍动物的重要传染病，OIE将其列为需通报疫病，我国也将其列为一类传染病。蓝舌病病毒毒力基因的研究对该病的防控具有重要意义。本项目拟利用已经建立的BTV-16（NB96/16株）反向遗传操作系统作为技术平台，通过已建立的BTV-16（NB96/16株）绵羊攻毒动物模型，结合乳鼠动物模型以及细胞水平检测，对BTV-2的毒力基因进行筛选。在获得BTV-2强弱毒株基因的基础上，分别将BTV-2强毒株基因片段2、5和10引入BTV-16（NB96/16株），通过分析重组病毒在细胞水平和动物水平的毒力变化，对引入基因与BTV-2毒力的相关性作出评价。对强毒株毒力基因与弱毒株对应基因进行比较，用上述方法评价差异氨基酸对BTV-2毒力的影响，进而筛选出影响BTV-2毒力的关键性氨基酸位点。本研究可以为BTV弱毒疫苗的研发和因BTV基因片段重组出现的新病毒进行风险评估提供参考。

蓝舌病（BT）是由蓝舌病病毒（BTV）引起反刍动物的重要传染病，OIE将其列为需通报疫病，我国也将其列为一类传染病。BTV毒力基因以及致病机制的研究对该病的防控具有重要意义。本研究在筛选BTV毒力基因过程中发现BTV毒力可能是由多基因共同决定，并且单基因对毒力影响不显著，因此无法准确定位单个毒力基因和影响病毒毒力的氨基酸位点。因此本研究尝试从BTV与宿主相互作用的角度去探索BTV的致病机制。研究发现BTV可以引起细胞自噬，而细胞自噬对病毒复制有益，抑制细胞自噬会对病毒复制产生不利影响。在此基础上，本研究鉴定了BTV引起细胞自噬的信号通路，证实了PI3K/Akt/TSC2/mTOR和[Ca2+]/CaMMKβ/AMPK/TSC2/mTOR通路是BTV引起细胞自噬的两条主要信号通路。