蓝舌病病毒新血清型毒株感染与基因重配特性的研究

Bluetongue virus (BTV) is the causative agent of bluetongue, one of the major hemorrhagic diseases in ruminants. Continuous emergence of new BTV serotypes and mutant strains produced by reassortment between different serotypes have brought severe challenge to the prevention and control of Bluetongue. In 2016, a candidate new serotype of BTV was isolated in Guangxi Province. Based upon obtained genome sequence of this new serotype BTV strain, we will further carry out research on infection and genetic reassortment characteristics of this virus in cells and susceptible animals levels. (I) Identify the infection and proliferation characteristics of the virus in diverse cell lines from different species; Demonstrate the characteristics of infection and pathogenicity of the virus and the immune response in artificially infected sheep and goat. (II) After co-infected cells and susceptible animals with the new serotype BTV strain and BTV-1 strain widely distributed in China, analyze whether reassortment could happened between two serotypes of strains and frequency of reassortment. The results of this study will help to reveal the characteristics of the new BTV serotype in terms of infection and genetic reassortment, and also provide a scientific basis for the prevention and control of bluetongue in China.

蓝舌病病毒(BTV)感染引起的蓝舌病是一种侵害反刍动物的烈性传染病。BTV新血清型毒株的不断出现，不同血清型毒株之间通过基因重配产生变异毒株，给本病的防控带来了严峻的挑战。2016年，我们在广西分离到一株新血清型BTV毒株，在完成该毒株全基因组测序的基础上，本项目拟进一步在细胞与易感动物两个层面进行新血清型BTV毒株感染与基因重配特性的研究：（1）将病毒分别感染不同物种来源的细胞，在细胞上明确病毒的感染与增殖特性；将病毒分别感染感染绵羊与山羊，在易感动物上明确病毒的感染特性、致病性以及感染动物的免疫应答特征。（2）将病毒与我国分布广泛的BTV-1型毒株分别共感染细胞与易感动物，在细胞与易感动物上分析两种血清型毒株间能否发生基因重配及基因重配频率特征。项目研究结果不仅有助于揭示新血清型BTV在感染特性与基因重配等方面的机制特征，也可为我国蓝舌病的防控提供详实可靠的科学依据。

蓝舌病病毒(BTV)感染引起的蓝舌病是一种严重侵害反刍动物的烈性传染病，BTV血清型众多，新血清型BTV不断出现，不同血清型之间无有效的交叉免疫保护，给本病的诊断与防控带来了极大的挑战，本项目研究主要包括了以下四方面工作。.（1）明确了我国新血清型BTV(BTV-29)的全基因组序列与进化特征，在细胞与易感动物(山羊)两个层面分析了病毒的感染特性。在细胞层面发现BTV-29可与BTV-1型毒株发生基因重配，且重配主要集中在Seg-7与Seg-10上。研究结果丰富了世界范围对BTV血清型多样性的认知，为分析我国新血清型BTV的来源与流行提供了线索，也为开发新血清型BTV的诊断与检测技术、流行病学与致病性研究提供了依据。.（2）建立了针对我国流行12种血清型BTV的RT-PCR检测方法，建立了世界范围流行27种血清型BTV的qRT-PCR高通量检测平台，可实现12小时内对BTV血清型的准确鉴定，为开展我国BTV血清型的诊断与分子流行病学调查提供了可靠的技术手段，已应用于我国南方地区的BTV流行病学调查研究。.（3）建立起成熟的BTV反向遗传技术体系，通过对病毒外层衣壳蛋白编码基因的人工重配，成功进行BTV血清型的转换，为开发针对新BTV血清型流行快速开发出相应的灭活疫苗，奠定了技术基础。同时，研究构建出表达BTV外层与内层衣壳蛋白的重组杆状病毒，感染SF9细胞后，细胞内产生出VLP颗粒，为BTV的VLP疫苗研究奠定了物质基础。.（4）在我国云南设立的牛羊等哨兵动物上进行虫媒病毒的监测，相继分离出BTV-5、BTV-7、BTV-9 与BTV-24等四种血清型BTV毒株，从牛血液中分离出新型环状病毒，研究结果丰富了对我国流行BTV与虫媒病毒多样性的认知，为进一步开展牛羊虫媒病毒的流行病学研究提供了线索。.