基于蛋白质组学探究疏肝理气法治疗慢性前列腺炎的疗效物质基础

Chronic prostatitis (CP) is a common clinical incurable diseases has become the industry consensus, and its incidence is due to a variety of complex etiology, and prostatic urethra smooth muscle dysfunction, an important cause of its clinical and animal studies confirmed our previous treatment of liver qi CP superiority, the governing law reflects multi-link, multi-target therapeutic effect, preliminary experimental study also confirmed the liver and gas law for the prostatic urethra smooth with good regulation, but the mechanisms are not clear, proteomics is a powerful healing method found in multi-link, multi-target drug target technology platform. The issue on the basis of complex multifactorial pathogenesis of CP characteristics, from the prostatic urethra smooth start, using two-dimensional electrophoresis, image analysis, such as mass spectrometry proteomics method for the determination of liver qi parts of rabbit smooth muscle cells from the influential protein and liver qi treatment of experimental CP rabbit smooth muscle in the prostatic urethra affect protein expression analysis and functional strength to explore the interaction of proteins designed using proteomics method to find a cure liver qi efficacy CP material basis of medical research complex disease etiology explore new ideas and new methods.

慢性前列腺炎（CP）是临床常见疑难病症已成为行业共识，其发病是多种复杂病因所致，而前列腺部尿道平滑肌功能失调为其重要病因之一，我们既往的临床与动物实验研究证实了疏肝理气法治疗CP优效，体现了该治法多环节、多靶点治疗效果，前期实验研究还证实了疏肝理气法对前列腺部尿道平滑肌有良好的调节作用，但其作用机制尚不清楚，蛋白质组学是强有力的发现中医治法多环节、多靶点的药靶技术平台。本课题依据CP发病多因素的复杂特点，从前列腺部尿道平滑肌入手，采用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定疏肝理气法对该部位离体家兔平滑肌细胞中有影响的蛋白质和疏肝理气法治疗实验性CP兔前列腺部尿道平滑肌中有影响的蛋白质，分析其表达强度和功能，探索其相互作用的蛋白质，旨在运用蛋白质组学技术发现疏肝理气法治疗CP疗效物质基础，对复杂病因疾病的中医药研究探索新思路和新手段。

慢性前列腺炎（CP）其前列腺部尿道平滑肌功能失调为重要病因之一，前期研究证实疏肝理气法对前列腺部尿道平滑肌有良好的调节作用，但其作用机制尚不清楚，故采用蛋白质组学技术平台。本研究：①通过建立兔前列腺部尿道平滑肌细胞培养体系，获得甲氧胺刺激平滑肌细胞功能失常的细胞模型；分为空白组、甲氧胺组、甲氧胺+酚妥拉明组、甲氧胺+AKM组；用蛋白质组学技术分析各组差异蛋白表达、基因功能、信号通路调控及调控网络构建。甲氧胺组+AKM干预后，和甲氧胺组相比，细胞凋亡或者死亡现象明显减少，贴壁细胞数量明显增多，形态恢复正常。②通过建立实验性CP新西兰兔模型，分为对照组，假手术组，模型组，艾可合剂低浓度组（AKML），艾可合剂中浓度组（AKMM），艾可合剂高浓度组（AKMH），获取各组平滑肌组织；用蛋白质组学技术分析各组干预后平滑肌组织中的蛋白质差异表达、基因功能、信号通路调控及调控网络构建；另外用免疫印迹法及ELISA法对上调或下调差异蛋白验证分析。③通过对新西兰兔前列腺部尿道平滑肌组织和细胞的差异蛋白等关键物质的整合分析，通过对新西兰兔前列腺部尿道平滑肌组织和细胞的差异蛋白进行整合分析：a明确干预后下调的蛋白MYH11；b明确疏肝理气的AKM干预后上调：ITM2B、G6PD、TMSB10、SERPINB10、ITGAM、PRG2、EPX、APOBR、PRG3；c明确AKM治疗后主要下调BAZ1A、ABCF2、MYH11、TPM2、CRABP2、RPL18、TPM1、COX4I1，但各剂量组同步下调的差异蛋白是MYH11；干预后发现主要上调CTSV、FKBP9、LOX、SCPEP1、NENF、TMOD2、SFPQ、ITM2B、CSTF3、G6PD、APOBR、WBP11，但各剂量组同步下调的差异蛋白是ITM2B、G6PD、APOBR。d最后对APOA1、COL3A1、CTSV进行ELISA实验验证；对MYH11、COL1A1、COL1A2三个蛋白进行免疫印迹法验证，与蛋白质组学分析基本一致。综上，通过对新西兰兔前列腺部尿道平滑肌组织和细胞的差异蛋白表达及鉴定、查询基因功能、分析信号通路调控并构建调控网络，明确了疏肝理气的复方中药AKM 治疗CP的疗效物质基础及它们之间的联系，为后续的分子机制研究明确了目标和方向。