各亚型CRF受体通过影响PLA2表达变化而影响肿瘤生长的研究

本研究为小额资助项目（No.30772596）后续工作。CRF家族肽（CRF、Ucn1，2，3）主要通过CRFR1和R2两种受体起作用。我们发现Ucn能够通过CRFR2抑制血管生成和肿瘤细胞生长。然而，抑制的详细机制并不明确，CRFR1抑瘤机制也不明确。PLA2水解膜磷脂释放花生四烯酸，下游COX-2-PGE2对内皮增殖及血管形成、肿瘤发生发展起重要作用。我们发现Ucn2能够影响血管内皮COX-2和PGE2的表达。由此推测CRF肽可能通过影响PLA2抑制细胞增殖和血管生成从而影响肿瘤生长。本研究1）用临床肝癌、小细胞肺癌、子宫内膜癌标本，测定PLA2表达并三维培养观察其与CRF受体-血管生成的相关性。2）分别导入1,2受体质粒至受体缺失肝癌细胞株，观察细胞增殖和凋亡及移植瘤生长；采用只分别表达1，2型受体的子宫内膜癌、小细胞肺癌细胞株，观察其移植瘤生长；观察PLA2与CRFR-肿瘤相关性。

本项目基本按计划执行，取得了预期成果。CRF家族肽参与包括炎症和肿瘤发生发展在内的多个病理生理过程中，发挥重要的生物学功能。同样，很多证据表明磷脂酶A2 (PLA2) 也参与到炎症和肿瘤的发生中。本研究的主要目的就是明确CRF各亚型受体在肿瘤发生发展中的作用机制，明确该作与和 PLA2之间的关系和一系列信号通路。研究成果如下：.1) 发现CRF家族肽通过CRF受体在前列腺癌细胞凋亡中的作用，CRFR1与CRFR2对凋亡基因Bcl2/Bax调节起相反作用，并且机制可能与调节cPLA2表达相关。CRFR1对前列腺癌细胞的增殖和凋亡的调节与CRFR2相反。 主要结果如下：a).CRF激动CRFR1降低Bax表达而提高Bcl2表达，Ucn2通过激动CRFR2升高Bax而降低Bcl2表达。b)在前列腺癌细胞株RM-1,CRF激活cPLA2。在分别过表达CRFR1、CRFR2的HEK293细胞中，CRF诱导cPLA2的表达而Ucn2对cPLA2的表达起到抑制作用。c) 在RM-1细胞中，CRF增加IL-1 蛋白表达以及cPLA2 mRNA 稳定性，而Ucn2 增加TNF-α和IL-1β 蛋白表达。2）我们经过CRF受体表达的检测，选定了两种人肝癌细胞株进行研究，即HepG2和SMMC-7721。HepG2细胞系同时表达两种CRF受体，CRFR1和CRFR2。而SMMC-7721细胞系几乎不表达这两种受体。在HepG2细胞中，我们可以同时观察两种受体的作用，而通过稳定转染技术，我们只转染一种CRF受体进入SMMC-7721细胞从而独立观察这一种受体的作用。在对这两种细胞进行研究后，我们观察到一个有趣的现象，UCN能够CRF受体依赖地、时间依赖地以及PLA2亚型依赖地影响到肿瘤细胞的迁移作用。结果显示激活CRFR1，能够在36 h增加cPLA2的表达，从而促进肝癌细胞的迁移；激活CRFR2，能够在24 h降低iPLA2的表达，从而抑制肝癌细胞的迁移。其中也研究了具体的分子机制，UCN能够通过对iPLA2启动子的特定区域进行抑制，从转录水平降低iPLA2的表达；而通过活化NF-κB增加cPLA2的表达。