CRF相关肽1型受体对结肠炎相关癌的作用机制研究

溃疡性结肠炎（UC）是一种肠道的非可控性炎症，UC患者有较高的结肠癌发病率，其肠壁浸润了大量表达促肾上腺皮质激素释放激素（CRF）相关肽及其受体的炎性细胞。研究表明CRF相关肽可激活其1型受体（CRFR1）加强炎性细胞NF-κB的活化，增加多种炎症因子，如IL-1β、IL-6和TNF-α的释放。这些炎症因子可促进恶变细胞增殖，抑制其凋亡从而促进肿瘤的发生。我们推测CRF相关肽可能通过上述途径促进结肠炎相关癌（CAC）的发生发展。为了明确CRF相关肽及其受体对CAC发生发展的作用，本研究拟在CAC小鼠模型，观察阻断或敲除CRFR1受体对CAC及其癌前病变的影响，分析它们对肠上皮细胞增殖和凋亡的作用，并采用骨髓交叉移植的方法比较骨髓来源的与非骨髓来源的细胞表达的CRFR1对CAC发生发展的差异。本研究旨在阐明CRF相关肽在UC向CAC转化中的作用及其机制，为寻找防治CAC的新靶点提供实验依据。

本项目执行顺利，达到预期目标。发现了：1）.CRHR1敲除鼠结肠癌病程发展明显慢于野生型小鼠。AOM+DSS造模后，CRHR1敲除小鼠（CRHR1-/-）同野生型小鼠（WT）相比，肿瘤数目及大小明显减小,且炎症、溃疡、增生等组织学评分明显低于WT，异型增生分级也多处于低度和中度异型增生，而WT较多处于中度和和重度异型增生。此外，CRHR1-/-结肠分泌的抗炎因子IL-4和IL-10明显高于WT，而促炎因子如IL-1β，IL-6，TNF- α及COX-2明显少于WT，此外趋附因子IFN-γ分泌量也小于WT。2）.CRHR1对结肠癌进展的影响发生在结肠癌早期。在给予AOM后的第10天，15天，20天和25天，通过分别对比CRHR1-/-和WT的组织学变化，发现早在结肠癌发生早期（10天-25天），CRHR1敲除鼠的癌症进程明显慢于野生型小鼠，从炎症浸润，溃疡，增生等方面进行组织学评分鉴定。此外促炎和抗炎因子的表达量也在早期开始发生差异；3）.CRHR1通过促进炎症细胞数目的增加及炎症因子的分泌能力，从而促进CAC的发生和发展。我们提取了小鼠的外周血单核细胞，对比野生型和CRHR1敲除鼠外周血内炎症细胞数目的差异，发现敲除鼠体内淋巴T细胞、B细胞和巨噬细胞数目明显小于野生型小鼠且CRHR1主要分布在巨噬细胞。于是我们提取了小鼠血液中的单个核细胞，对比野生型和CRHR1敲除鼠单核细胞的分泌炎症因子（IL-1β，IL-6，TNF-α和IL-10）能力,发现敲除鼠单核细胞分泌促炎因子的能力小于野生型小鼠；4）.CRHR1通过上调NF-κB入核及STAT3磷酸化两条信号通路，促进结肠上皮细胞的增殖并抑制其凋亡。Brdu结果显示，敲除鼠结肠部位增殖的细胞明显少于野生型小鼠，而Turnel的结果显示，敲除鼠结肠部位凋亡的细胞明显多于野生型小鼠。通过分析NF-κB的入核情况，发现CRHR1-/-小鼠体内NF-κB的入核减少，且STAT3的磷酸化水平也明显低于野生型小鼠。这些结果为了解CRFR1在肠炎向肠癌转化方面的作用提供了重要的实验依据。