基于方剂配伍理论和药理机制的抗脑缺血中药有效成分配伍研究

在中医治疗脑缺血益气活血法则指导下，根据方剂相使配伍理论，基于中药有效成分配伍模式，在前期证明黄芪总苷（AST）和三七总皂苷（PNS）配伍协同抗脑缺血的基础上，对AST和PNS中的主要有效成分进行配伍研究，比较AST和PNS中的主要成分配伍与组分配伍、饮片配伍作用的差别，并从氧化应激及其调节机制研究有效成分配伍抗脑缺血的作用机制，最终形成一个安全有效、成分清楚、质量可控、机制明确的新型有效成分配伍复方。这对于进一步扩大中药有效成分的应用，提高中医药防治脑缺血的疗效具有重要的应用价值；同时也为中药方剂的成分配伍和创新型中药复方的研究提供一个参考模式，从而丰富方剂配伍的理论和方法。

本项目在在中医治疗脑缺血益气活血法则指导下，根据方剂相使配伍理论，基于中药有效成分配伍模式，选择常配伍使用的益气药黄芪和活血药三七，对黄芪具有心脑血管效应的有效组分黄芪总苷（AST）中的有效成分黄芪甲苷和三七抗脑缺血的有效组分三七总皂苷（PNS）中的有效成分人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1进行有效成分的配伍研究。用中药有效成分配伍模式研究黄芪和三七中有效成分配伍抗脑缺血的组方规律，寻找其抗脑缺血的有效配伍组合，并针对脑缺血的病理生理机制，从调节氧化应激的Keap1/Nrf2/ARE通路、能量代谢的AMPK通路、炎症反应的NF-κB通路以及内质网应激的凋亡通路比较研究有效成分配伍复方与单个有效成分作用的异同，从而阐明有效成分配伍复方抗脑缺血损伤的作用机制。结果发现：人参皂苷Rg1 50μmol/L、黄芪甲苷0.78125 μmol/L、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1 各1.5625 μmol/L 配伍为抗PC12细胞氧化损伤的有效配伍剂量，能抑制活性氧的生成，提高线粒体膜电位，增强对细胞凋亡的抑制。黄芪甲苷：40 mg/kg，人参皂苷Rg1：50 mg/kg，人参皂苷Rb1：40 mg/kg，三七皂苷R1：10 mg/kg为小鼠抗脑缺血损伤的最佳配伍剂量；黄芪和三七中的四种有效或两种有效成分配伍（黄芪甲苷+人参皂苷Rg1或黄芪甲苷+三七皂苷R1）可增强其抗脑缺血后氧化应激损伤，其机制与激活Nrf2/HO-1途径和促进下游抗氧化基因HO-1等表达有关；四种主要有效成分配伍或者黄芪甲苷与Rg1、R1合用通过上调脑组织AMPK磷酸化水平，增强脑组织GLUT3的表达，改善了脑组织的能量代谢；黄芪和三七的主要有效成分配伍可增强对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和炎症反应的抑制作用，其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活、调节脑缺血后内质网应激有关。