基于中药方剂配伍机理的中药有效成分诱导食管癌前病变分化药物的研究

我国食管癌死亡人数占全球该病死亡的50%以上。食管鳞状上皮不典型增生是食管癌前病变的必经阶段，也是预防和控制食管癌的关键。分化诱导剂可使肿瘤细胞逆转向正常细胞分化，达到治疗、甚至治愈肿瘤的目的。国内外在该方面的研究虽取得了一定进展，但现有分化剂副作用大、未见治疗实体肿瘤的报道；对中药分化诱导剂的研究，多为单体成分的体外实验、缺乏多成分组合的体内和临床效果分析；未见食管癌前病变动物模型的建立和逆转分化的研究。连翘、天花粉蛋白、党参、香加皮均有抗肿瘤、诱导肿瘤和癌前病变细胞分化、调节免疫功能等作用。为了提高对癌前病变细胞逆转分化的效果，本课题建立家兔颊黏膜鳞状上皮癌前病变模型，将四味中药的主要有效成分以正交设计形式，组成12个系列配伍方和4个单味药，明确组方中不同成分的数、量、比例变化与药效的相关性，研究逆转食管癌前病变的作用效果及机理，为该组方逆转癌前病变治疗的新药开发和临床应用奠定基础。

本课题按照课题计划任务书年度计划进行，稍作调整。.食管癌的发生、发展是一个长期的、多阶段的复杂过程，轻度不典型增生发展缓慢，癌变危险度低，而中度和重度不典型增生则比较稳定的向癌发展，称为癌前病变阶段，是不典型增生是癌的后备人群，是预防和控制食管癌的关键群体。本课题组多年来致力于中药抗肿瘤研究，发现中药香加皮、党参、连翘、天花粉蛋白对食管癌具有显著的抑制作用，本研究依照“君臣佐使“及“扶正培本”等中医理论，将中药香加皮、党参、连翘、天花粉蛋白进行不同比例组方进行逆转食管癌癌前病变研究. 用诱癌剂4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitro-quinoline-1-oxide,4NQO)成功诱导建立了食管癌前病变模型。我们的研究结果为：1）成功用4NQO诱导建立食管癌癌前病变模型，第21周时，85%的小鼠均发生不同程度不典型增生；小鼠癌前病变模型中CD4+T，CD8+T 和CD4+CD25+Foxp3+T在脾淋巴细胞百分率随着诱癌时间延长逐渐增加， B7-H4分子随之上调； 2）第24周时，“连花参加”方预防或治疗均可减缓食管癌病变的进程，与ATRA的药效相当；3）在4NQO诱导的小鼠食管癌前病变，轻度不典型增生-中不典型增生-重不典型增生-食管癌的过程中，B7-H4的表达水平有显著差异，P＜0.05, 并且随着食管癌前病变程度的加重而升高；4）连花参加方可通过抑制β-catenin蛋白的聚积，阻止Wnt/β-catenin通路的激活逆转食管癌癌前病变，这可能是组方抑制小鼠食管癌变逆转的机制之一。此外，在本研究课题进行的同时，我们从中草药木鳖子中筛选到一种中药单体-木鳖子对羟基桂皮醛，并发现其可在体外诱导食管癌细胞分化，具体研究结果为：中草药木鳖子对羟基桂皮醛可诱导食管癌细胞呈现分化形态，增殖减慢，G0/G1期阻滞，通过p-ERK1/2、GTP-RhoA及p-SAPK/JNK通路诱导食管癌细胞中肿瘤标记物CEA及SCC表达减少， C-myc及N-myc蛋白表达降低。体内研究结果显示，对羟基桂皮醛抑制食管癌细胞在裸鼠体内的生长。本课题研究明确了“连花参加方“作为逆转癌前病变的中药组方，能够抑制食管上皮向食管癌转化进程，同时也明确对羟基桂皮醛作为体外能够诱导食管癌细胞分化的有效药物，具有体内逆转食管癌癌前病变的潜力，我们将进一步深化研究，力争在中药逆转食管癌研究中做出贡献。