基于PAF拮抗活性的辛夷化合物组与代谢物组的多维色谱-组合质谱法研究

中药质量控制现代化的一个重要标志是保证中药有效成分体外与体内质量稳定、可控。针对现代中药质量控制面临的规模化分离制备与定性定量分析方法学瓶颈，以及鼻病良药辛夷药材基础研究与应用研究存在的现实问题，本课题拟选用辛夷为研究对象，通过辛夷挥发油、木脂素、黄酮苷、生物碱等化合物组的优化制备，在体外、体内化学筛选、活性筛选与代谢筛选方法学研究的基础上，建立以血小板活化因子（PAF）拮抗活性跟踪与实验性变应性鼻炎大鼠模型药效试验相结合的辛夷活性化合物组及其体内代谢物组的多维色谱分离（制备）-组合质谱技术定性定量分析平台，探讨辛夷活性化合物组指标成分与指纹成分及其体内代谢过程，比较体外化学指纹图谱和体内代谢指纹图谱的差异，揭示与药理学效应相关的辛夷化合物组活性成分谱效学特征，为辛夷药效物质基础多组分药代动力学相互作用研究以及现代中药制剂开发提供技术借鉴。

本项目以辛夷药材为研究对象，开展现代中药质量控制中的规模化分离制备与定性定量分析方法学研究。本研究首先确定辛夷中的主要化学成分，采用气相色谱-质谱联用技术鉴定了辛夷挥发油中45个萜类化合物；采用加速溶剂萃取结合液相色谱-质谱联用技术鉴定了辛夷醇提物中19个化合物，包括黄酮、生物碱、木脂素类及其它们的同分异构体。在此基础上，本研究构建了适合辛夷化合物组多组分单体规模化制备的多维色谱切割/高速逆流色谱制备-液相色谱在线纯度检测分析平台，对其中黄酮、生物碱及木脂素类活性单体进行制备。制备过程中，采用近红外光谱测定大孔吸附树脂分离纯化的粗提物，以木脂素成分为指标，优化粗提物的分离纯化条件；同时建立并优化了高效液相色谱-电喷雾检测器定量分析四种木脂素的方法，开展中药有效成分的“一测多评”检测，以此实现了辛夷中活性组分的鉴定、提取、分离、制备及定量。研究进一步建立了多维色谱富集切割-全二维色谱优化分离-串联质谱定性检识方法，对辛夷提取物的化学指纹谱和代谢指纹谱进行研究，化学指纹谱中共鉴定出19个化合物，代谢指纹谱中辨识到9个活性成分。其中大鼠给予辛夷挥发油组分后，血浆中检测到1,8-桉叶素及1个代谢产物；给予辛夷木脂素类化合物后检测到了松脂素二甲醚，木兰脂素，里立脂素B二甲醚，表木兰脂素和1个代谢产物，确定了辛夷提取物入血的主要成分是挥发油中的1,8-桉叶素和木脂素类成分。本研究进一步建立以血小板活化因子（PAF）拮抗活性跟踪与实验性变应性鼻炎大鼠模型药效试验相结合的，辛夷活性化合物组及代谢物组的多维色谱分离-串联质谱定性定量分析技术平台，确定了辛夷木脂素类化学成分具有协同抗炎作用，为辛夷药效物质基础多组分药代动力学相互作用研究以及现代中药制剂开发提供技术借鉴。