壮药复方仙草颗粒对糖尿病肾病GIPＲdn转基因小鼠肾足细胞保护作用及其机制研究

Apoptosis of renal cells and its functional impairment, resulted from oxidative stress induced byhigh glucoseand mitochondrial injury, is an important anddecisive factor to develop diabetic nephropathy (DN). Studies have shown that Foxo4 played a key rolein downstream, oxidative stress, apoptosis induced by insulin signal transduction systems. So we hypothesis that FOXO4 would make a cross-talk with insulin signal transduction,oxidative stress and apoptosis. FOXO4 would play a key role in protecting renal cells and delaying DN. We research on mechanism of protective effect of Zhuang medicine Compound Xiancao particles on renal podocytes of GIPRdn transgenic diabetic nephropathy mice.We detect the expression and phosphorylation of key proteinIRS2、PI3K-Akt、JNK、Cytoc、Caspase 9 by RT-PCR and WB. These findings would be employed to develop a new drug with safe and effective protection of DN from Amygdalin.

高糖诱导的氧化应激、线粒体损伤等导致的肾足细胞凋亡和功能损伤，是推进糖尿病肾病（DN）发生发展的重要决定因素。研究表明，Foxo4在胰岛素信号转导系统中重要的下游调控因子、氧化应激、细胞凋亡中发挥关键作用。基于此，我们以“Foxo4是构建胰岛素信号转导、氧化应激和细胞凋亡三者串话的枢纽环节，调控Foxo4，保护肾足细胞是延缓DN进程的关键”为假说，以DN GIPＲdn转基因小鼠模型为研究对象，考察壮药复方仙草颗粒对DN小鼠肾足细胞形态和功能、增殖和凋亡的影响，明确其对DN小鼠肾足细胞的保护作用。并利用Real-time PCR、western blot等方法检测Foxo4及相关通路关键节点蛋白（IRS2、PI3K-Akt、JNK、Cyto c、Caspase 9）的表达水平及活性，验证假说并探讨广西道地壮药复方仙草颗粒对DN小鼠肾足细胞的保护作用机制，为该药的进一步研发与应用提供科学依据。

1.项目的背景.DN作为DM最常见最严重的微血管并发症，是导致ESRD和透析的最常见主要原因，是DM患者致死的一个重要原因。据IDF统计，2030年全球DM病人将达到5.52亿，2010年中国人群DM患病率为11.6%已成为全球DM患者最多的国家。DN正在严重危害着公共卫生，防治DN形势极为严峻。DN足细胞的损伤和损失是DN一个早期特征，找寻早期防治足细胞损伤的有效方法延缓DN进展十分重要。高糖诱导的氧化应激、线粒体损伤等导致的肾足细胞凋亡和功能损伤，是推进DN发生发展的重要决定因素。研究表明，Foxo4不仅是胰岛素信号转导系统中重要的下游调控因子，也在氧化应激、细胞凋亡中发挥着关键性作用。我们认为：Foxo4是构建“胰岛素信号转导”、“氧化应激”和“细胞凋亡”三者串话（crosstalk）的枢纽环节，调控Foxo4，保护肾足细胞是延缓DN进程的关键。初步研究证实壮药复方仙草颗粒具有抑制炎症，保护肾足细胞，减少蛋白尿，抗肾纤维化，延缓肾小球硬化持续进展的作用。因此，本研究以DN GIPＲdn转基因小鼠模型为研究对象，考察壮药复方仙草颗粒对DN小鼠肾足细胞的保护作用及机制。.2.主要研究内容.壮药复方仙草颗粒对DN GIPＲdn转基因小鼠肾足细胞保护作用评价及作用机制研究。.3.重要结果、关键数据.研究结果表明证实，壮药复方仙草颗粒可减少GIP Rdn转基因小鼠和KKAy小鼠尿蛋白、改善肾脏病理和肾功能对肾脏具有保护作用；其可能与减少KKAy小鼠NLRP3、Caspase-1、IL-1β在肾组织中的表达，调控NLRP3-Caspase-1-IL-1β信号转导通路而减缓DN炎性损伤。通过抑制PI3K/Akt信号通路调控AKT、JNK、caspase9的表达，使Foxo4磷酸化水平减少、活性增加，对DN小鼠动物模型的肾脏具有保护作用，减缓DN的发展进程。.其可改善早期DN患者的肾功能，减少尿白蛋白排泄，抑制 DN患者的微炎症反应，降低 DN患者的UAER、Scr、IL-6、TNF-α、CRP。.4.科学意义.阐明壮药复方仙草颗粒保护DN小鼠肾脏的作用；揭示其调控Foxo4基因和蛋白质表达水平，改善胰岛素信号转导、抑制氧化应激和细胞凋亡的分子机制；为广西特色壮药八仙草、三七的进一步研制开发和临床应用提供科学依据。