复方仙草颗粒对白细胞介素13诱导损伤的人肾小球足细胞影响的研究

采用IL-13诱导传代培养的人肾小球足细胞建立足细胞损伤模型，给予日本大耳白兔来源复方仙草颗粒药物血清并以雷公藤甲素、地塞米松为对照。运用间接免疫荧光染色法，用激光扫描共聚焦显微镜摄片，图像分析仪分析，应用形态计量学方法，分别检测足细胞足突表面积密度、突触长径和足突平均宽度，观察骨架蛋白F-actin结构，分析连接蛋白ZO-1的表达；用Western Blotting法检测STAT 6磷酸化水平；用流式细胞仪测定足细胞凋亡率。以探讨复方仙草颗粒对足细胞损伤的保护及修复作用机制。本项目用血清药物学方法，将足细胞结构变化与体视学计量参数相结合，运用现代生物科学技术进行定量研究，探讨广西道地药材复方仙草颗粒对足细胞损伤的保护及修复机制，为该药的进一步研制开发和临床应用提供科学依据。为用现代科学理论阐明中医药的作用机理研究提供可借鉴经验。预期成果将有益于肾足细胞损伤的治疗，利于广西特色中草药开发。

本项目主要研究复方仙草颗粒在体内体外对人肾足细胞的保护作用。通过白细胞介素13诱导肾足细胞损伤后，给予复方仙草颗粒中的主要成分三七皂甙1等，观察足细胞表面标记物及相关信号通路的变化。本研究首次发现复方仙草颗粒中的主要成分三七皂甙1可抑制足细胞凋亡。在损伤的足细胞中，足细胞相关标记物podocin, nephrin和CD2AP表达明显下调，但给予复方仙草颗粒中的主要成分三七皂甙1后以上基因所转录的mRNA水平明显升高并且所调控表达的蛋白表达水平也有所提高。此外足细胞损伤的标记物desmin的表达也在损伤组中明显升高，在治疗组中有所下降。体内实验中肾小球的基底膜在损伤组中明显增厚，而治疗组则有所恢复。通过鬼笔环肽对足细胞骨架F-actin染色观察到，复方仙草颗粒可保护肾足细胞骨架。在信号通路的研究中STAT6的磷酸化水平明显升高，并且复方仙草颗粒可通过PI3K/Akt/mTOR信号通路从而调控足细胞凋亡。本项目运用现代生物科学技术进行定量研究，探讨广西道地药材复方仙草颗粒对足细胞损伤的保护及修复机制，为该药的进一步研制开发和临床应用提供科学依据。目前已完成申报书所涉及实验并进一步扩展到PI3K/Akt/mTOR信号通路对复方仙草颗粒介导的足细胞保护中的作用，并且已接收SCI论文2篇，培养研究生3名。