应用RNAi靶向沉默P2X7R治疗阿尔茨海默病的实验研究

P2X7R属于配体门控离子通道P2X家族，为跨膜受体，调节介导胞内多种信号通路。在中枢神经系统中P2X7R主要位于单核/巨噬细胞系统，在生理状态下呈低水平表达，参与免疫调节，具有神经保护作用；在阿尔茨海默病等神经退行性疾病中P2X7R表达上调，激发神经退行性变，促进神经元死亡和轴突丢失等神经毒作用，P2X7R拮抗剂BBG可预防神经退行性变疾病亨延顿氏病神经元死亡。但对阻断或降低P2X7R表达水平是否可以逆转阿尔茨海默病的病理过程尚未见报道。本课题拟利用RNAi技术靶向沉默P2X7R表达，降低AD神经系统中P2X7R水平，通过功能和分子影像学、分子生物学、行为学、病理学的检测，系统地评价P2X7R作为AD治疗靶点的可行性，为进一步的临床应用研究提供实验依据。

在中枢神经系统中，P2X7受体主要位于小胶质细胞内。在生理状态下呈低水平表达，在阿尔茨海默病等神经退行性疾病中P2X7受体表达上调，激发神经退行性改变，促进神经毒性作用。本研究分别以小胶质细胞和APP/PS1转基因小鼠为研究对象，通过RNA干扰技术在体外及活体内沉默异常表达的P2X7受体，观察其对小胶质细胞功能及APP/PS1转基因小鼠学习记忆能力的影响。研究结果显示通过RNA干扰技术能有效沉默体外培养小胶质细胞内的P2X7受体，抑制小胶质细胞释放炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、促进其吞噬β淀粉样蛋白。在活体实验中，研究结果显示无论是颅内注射Lenti-shRNA还是尾静脉注射shRNA-RVG9R均能将shRNA引入APP/PS1转基因小鼠脑内发挥RNA干扰作用，沉默转基因小鼠脑内异常表达的P2X7受体，减少β淀粉样蛋白沉积和神经元凋亡，改善APP/PS1转基因小鼠的神经退行性病理改变及学习记忆能力。P2X7受体有望成为RNA干扰治疗阿尔茨海默病的一个新的、有效的治疗靶点。