大网膜乳斑巨噬细胞衍生因子对Lgr5+胃癌干细胞趋化增殖影响及其机制的研究

The interaction between tumor stem cell and microenvironment (niche) play an Important role in the process of tumor recurrence and metastasis.In our privous studies,we found that gastric cancer cells selectively infiltrate into the milky spots in the early stages of peritoneal cancer dissemination, and CCL22-CCR4 axis plays an important role in this selectively infiltration，cancer stem cells infiltrating in milky spot area is a decisive factor in the process of peritoneal metastasis and gastric cancer stem cells expressed Lgr5 . In this study,we plan to setup Lgr5 + gastric cancer stem cells milky spots metastasis model, to study the relationship between the CCL22 and CCR4 of Lgr5+ gastric cancer stem cells, to clarify whether blocking Lgr5+ gastric cancer stem cells surface CCR4 receptor can inhibit the happening of gastric cancer peritoneal metastasis. The aim was to establish a new treatment method for preventing peritoneal metastasis by focusing on the chemotaxis of gastric cancer cells.

肿瘤干细胞与微环境（niche）的相互作用在肿瘤复发转移过程中具有重要意义。从肿瘤干细胞及其微环境两方面着手进行研究，有助于阐明胃癌转移发生的机制。我们前期研究发现：1.在胃癌腹膜转移发生的早期阶段，腹腔游离胃癌细胞首先选择性侵犯腹膜乳斑区域；2.乳斑内的趋化因子及其受体CCL22-CCR4轴可能是胃癌腹膜特异性乳斑转移的分子机制之一,3.胃癌干细胞转移是胃癌腹膜转移发生的决定性因素，胃癌干细胞高表达Lgr5+ 。我们计划在前期工作基础上进一步制作Lgr5+胃癌干细胞胃癌乳斑转移模型，明确巨噬细胞衍生因子CCL22对Lgr5+胃癌干细胞的趋化及刺激增殖机制，进一步明确阻断Lgr5+胃癌干细胞表面CCR4受体是否是抑制或阻断胃癌术后腹膜转移的潜在治疗方法之一。

大网膜乳斑(Milky Spot)是一种特殊的解剖学结构，由大量巨噬细胞构成。乳斑内的巨噬细胞来源于血液中的单核细胞 , 在大网膜乳斑区，通过间质细胞产生的化学因子、细胞因子、生长因子等被招募到乳斑，分化为巨噬细胞。根据微环境的变化，刺激分化的因子不同 , 可分化为经典激活的巨噬细胞 (M1 型 )和选择性激活的巨噬细胞 (M2 型，肿瘤相关巨噬细胞 )。PTX 3(又称tsg-14)是长五肽亚家族的原型成员，是由天然免疫细胞产生的，它与多个配体相互作用，在天然免疫、炎症调节和基质沉积中起着重要作用，PTX 3在肿瘤相关炎症的治疗中起着重要的作用。在过去的十年中，PTX3也参与了肿瘤发展的各个方面，包括肿瘤的发生、血管生成、转移和肿瘤免疫调节,在胃癌中鲜有报道。在资金支持下，本项目旨在探究PTX3与巨噬细胞相关因子作用在胃癌侵袭迁移及乳斑转移中的机制。首先我们验证了PTX3在胃癌组织及胃癌细胞中的低表达情况，其次通过查阅文献加上进一步研究得出巨噬细胞因子TNF-α能够负性调节PTX3的表达，并通过调节PTX3表达来促进胃癌的迁移侵袭，并在体外实验及体内小鼠实验得到了验证。进一步，我们通过胃癌细胞与巨噬细胞共培养技术模拟胃癌乳斑转移环境，通过流式细胞学及PCR等技术来探讨胃癌乳斑转移微环境中PTX3对M1、M2巨噬细胞活化影响。我们推测通过上调胃癌细胞系中PTX3表达，通过共培养模拟乳斑胃癌转移能够抑制巨噬细胞向M2型的分化，促进向M1型的极化，从而抑制胃癌乳斑转移成瘤趋势，目前后续研究正在进行中，本项目通过探讨胃癌乳斑区转移的机制，进而得出乳斑区转移中巨噬细胞转化相关机制及调控，在激活M1和转化M2 两个方面入手，探讨预防胃癌术后腹膜转移的发生和发展的机制，从而对治疗胃癌术后腹膜转移给予相应的辅助治疗策略。