限制/开放输液对兔肠缺血-再灌注后血清内毒素水平、肠上皮细胞凋亡及相关基因 Bcl-2和Bax的调节与干预

手术中限制输入液体具有降低术后促炎性细胞因子释放、改善机体免疫功能和降低术后并发症的作用，其机制尚需要进一步的明确。本课题观察兔在麻醉期间行限制/开放两种输液方案，肠缺血-再灌注损伤后，肠黏膜上皮细胞的凋亡及凋亡调控基因Bcl-2／Bax mRNA表达的变化。取60只雄性日本大白兔，随机分为2组：麻醉手术期间输入乳酸林格液8mlokg-1oh-1为限制组30只，乳酸林格液14mlokg-1oh-1为开放组3O只，建立兔肠系膜上动脉夹闭肠缺血-再灌注模型，分别在造模后24 h、48 h、72h，取门静脉血用改良基质偶氮显色法检测血清内毒素水平，取回肠末端小肠组织，用光镜及电镜观察形态学改变，TUNEL法检测上皮细胞凋亡指数，逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)法测定凋亡基因Bax，Bcl-2表达。为明确限制性输液降低术后并发症的机制，制定合理的围手术期液体治疗方案提供确实可靠的科学理论依据。

背景 在临床的手术麻醉过程中液体治疗起到了举足轻重的作用，围手术期液体治疗是围手术期医学的一项关键技术，其与术后并发症密切相关，恰当的液体治疗方案不仅需要在围手术期维持患者生命体征平稳以及内环境稳定，而且还要有利于术后的康复。 .目的 观察限制性输液和开放性输液对兔肠缺血再灌注损伤小肠细胞凋亡的影响。 .方法与内容 70只日本大白耳兔随机分成3组，对照组（Control，n=10），没有进行任何干预直接处死；肠缺血再灌注（IRI）限制性输液组（restrictive fluid group ，RFG，N=30，静脉输液速度是8 ml•kg–1•h–1,）麻醉手术期间静脉输注的是乳酸林格氏溶液。寻找到实验动物即兔子的肠系膜上动脉（superior mesenteric artery ，SMA），用动脉夹阻断SMA60分钟后松开动脉夹使SMA重新恢复血流后继续再灌注120分钟（模型复制成功的标准为缺血处肠系膜微动脉搏动消失；再灌注前肠道淤黑、肿胀；动脉夹松开后缺血处肠系膜微动脉恢复搏动）。麻醉清醒后继续喂养，分别于术后24h、48h、72h各处死10只兔子（即每个时间段处死兔子,N=10肠IRI开放性输液组即（liberal fluid group, LFG, N=30，静脉输液速度是14ml•kg–1•h–1）只有麻醉手术期间输液速度的与限制性输液组（RFG）不同，其他的干预处理措施与RFG相同。取小肠回盲部用TUNEL法检测小肠细胞凋亡用qRT-PCR检测其凋亡基因Bcl-2和Bax在mRNA水平上的表达。 .结果 兔肠缺血再灌注后3个时间点RFG小肠细胞的凋亡数明显少于LFG（P<0.01）。Bcl-2的表达水平RFG明显高于LFG（P<0.01），而促凋亡基因Bax的表达低于LFG（P<0.01）。RFG在24H、48H、72H的血清内毒素的值分别为：0.28±0.03；0.21±0.04；0.14±0.02。（Eu/ml）LFG在24H、48H、72H的血清内毒素的值分别为：0.33±0.06；0.48±0.05；0.28±0.02。（Eu/ml）在三个时间段LFG血清内毒素的值比RFG要高，差异有统计学意义（P<0.05）。.结论 与开放性输液方案相比限制性输液方案能减轻兔肠缺血再灌注损伤，减少小肠细胞凋亡。