促甲状腺激素对胆固醇酯转运蛋白（CETP)的影响及其机制

The regulatory effects of TSH on the tissues and organs besides thyroid is one of hotspots in the field of endocrinology.We demonstrated that TSH played a key role in cholesterol synthesis in liver cells, by acting on the TSH receptor and stimulating the cAMP/PKA/CREB signaling system. However, TSH is not only related to the level of cholesterol, but also related to the component of lipoprotein according to the data from the recent epidemiological investigations. So far, whether TSH plays a crucial role in the transport of cholesterol has not yet been found in any literature. .Cholesteryl Ester Transfer Protein (CETP) is an important transportprotein in cholesterol metabolism. It is secreted primarily by the liver tissue.This project is around the TSH and CETP, using in vivo (through surgical resection of the thyroid gland, drug induced hypothyroid, TSHR gene knock out and so on to produce different kind of animal models) and in vitro (by TSH stimulating liver cells and disturbance signal transduction technology) experimental approaches with the combination of research strategy. The aim of this study is to investigate whether TSH influence cholesterol transport via regulating the expression of CETP after binding to TSHR on hepatocytes, and explore the related mechanism..This is a strong innovative research, which can open up the understanding of the TSH physiological function.

TSH对甲状腺外组织器官的调节作用是当前内分泌专业领域的研究热点。我们的前期研究结果提示，TSH与受体结合后，通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路在肝脏胆固醇合成中起到关键作用。而近年来的流行病学调查发现，TSH不仅与总胆固醇水平有关，与脂蛋白的组成也密切相关，是否TSH在胆固醇转运中也起到重要的作用？国内外至今未见相关报道。.胆固醇酯转运蛋白（CETP）是胆固醇代谢中重要的转运蛋白，肝脏是主要的血浆CETP来源。本项目拟围绕TSH与CETP，采用体内（手术切除甲状腺、药物诱发甲减、TSHR基因敲除等多种动物模型）和体外（TSH刺激肝细胞和干扰信号转导等技术）相结合的研究策略，探索TSH与TSHR结合后，是否通过影响CETP的表达参与胆固醇转运的调节及其相关的机制。 .本课题是一项较强的创新性研究，可开拓对TSH生理作用的认识。

TSH对甲状腺外组织器官的调节作用是当前内分泌领域的研究热点。是否TSH在胆固醇转运中也起到重要的作用？国内外未见相关报道。.本项目主要围绕TSH与胆固醇酯转运蛋白（CETP），采用了体内（药物诱发亚临床甲减、TSHR基因敲除动物模型、甲减和亚临床甲减人群）和体外（TSH刺激肝细胞）相结合的策略，探讨了TSH在肝脏胆固醇转运中存在的调节作用。.（1）小鼠是否表达CETP的相关研究。.应用Western-blot、免疫荧光，免疫组织化学染色的方法分别对小鼠的肝组织、人肝组织等进行检测，研究结果显示小鼠肝脏组织表达CETP。.（2）不同鼠龄的小鼠CETP表达的变化。.用Western-blot方法发现小鼠胚胎肝细胞系（BNL）CETP表达量较成年小鼠肝脏CETP表达量高出2.1倍；新生小鼠肝组织CETP表达量较成年12周小鼠CETP表达量高出1.8倍。研究提示小鼠表达CETP且新生小鼠表达量高于成年小鼠。.（3）亚甲减小鼠胆固醇转运的相关研究。.研究发现亚甲减组较正常对照组血浆TC、LDL-C明显升高。亚甲减组肝内总胆固醇含量及游离胆固醇酯含量较正常对照组升高。与对照组相比，亚甲减小鼠ABCA1的表达增加了70％。.（4）运用TSHR基因敲除小鼠模型，发现TSH通过肝脏TSHR影响CETP 和ABCA1的表达。.研究显示Tshr+/+小鼠较Tshr-/-小鼠肝内总肝固醇含量及游离胆固醇含量明显升高。并运用RT-PCR的方法检测发现Tshr+/+组ABCA1的表达量明显高于Tshr-/-组， 用western-blot的方法检测发现Tshr+/+小鼠ABCA1表达量高，CETP蛋白表达较Tshr-/-小鼠CETP蛋白表达量低，与亚甲减小鼠模型结果相呼应。.（5）在细胞实验中验证TSH对CETP基因、蛋白表达及其活性的影响。.应用HepG2细胞，在体外验证了TSH对CETP的影响。检测了与胆固醇转运相关分子的表达，包括LDLR以及SR-B1。研究显示TSH成剂量依赖性降低HepG2细胞CETP的mRNA、蛋白的表达及活性。.（6）观察了CETP活性在甲减及亚甲减人群中的变化。.收取符合条件的甲减、亚甲减及正常对照人群血清，检测其CETP活性。结果发现：甲减组及亚甲减组CETP活性较正常对照组均降低，亚甲减组降低程度不如甲减组。.本课题研究结果可开拓对TSH生理作用的认识。