人肠道病毒71型的转基因小鼠模型

近年来在我国爆发的手足口病疫情是严重威胁婴幼儿健康的传染病之一，该病的主要病原体是人肠道病毒71型（EV71），主要发病特点是手足口病，疱疹性咽峡炎，脑膜脑炎，神经源性肺水肿或肺出血和死亡。该病毒的感染和致病机制目前还不清楚，并且尚无有效的疫苗和治疗药物来缓解手足口病疫情。现有模型有免疫系统未成熟，载毒时间短的缺点，成为致病机制、疫苗和药物研究的限制条件。建立我国流行毒株的成年小鼠模型，将极大的促进致病机制、疫苗和药物研究，为我国手足口病疫情控制和儿童健康提供研究基础。最新的研究表明人PSGL-1和SCARB2蛋白是人EV71病毒的受体，本项目拟建立PSGL-1和SCARB2转基因小鼠，以提高病毒对小鼠的噬性，增强感染力，从而建立人源EV71受体的小鼠模型，为发病机制、疫苗和药物研究提供理想模型。

目的：.人肠道病毒71型(EV71)主要感染6岁以下婴幼儿，引发手足口病，重症可导致死亡，是严重威胁我国婴幼儿健康的重要感染性疾病之一。建立EV71的动物模型，是进行致病机制和防治研究的基础。在本课题立项之际，国内尚无理想的EV71动物模型，且小鼠对国内流行的C4亚型EV71毒株不敏感，因此通过转基因技术，提高小鼠对EV71的敏感性，进而建立小鼠模型，是本课题的主要目标。.方法与结果：.人PSGL-1蛋白和SCARB2是日本学者鉴定的EV71侵染人细胞的受体，本课题拟通过分别建立表达两种受体的转基因小鼠，以期提高小鼠对病毒的敏感性，进而建立转基因小鼠模型。通过转基因技术，建立了分别表达人PSGL-1和SCARB2蛋白的转基因小鼠，分析表明表达受体的小鼠组织与EV71主要侵染人的组织相同：脑和骨骼肌，通过将PSGL-1和SCARB2交配获得了双受体表达的转基因小鼠。随后，将EV71临床分离株在小鼠体内进行适应，获得了可感染小鼠并致死的EV71小鼠适应株，建立了感染10日龄和两周龄的小鼠模型。将EV71临床分离株和小鼠适应株分别感染转基因小鼠，发现PSGL-1和SCARB2转基因小鼠在面临病毒感染时具有相似的特征：对临床分离株敏感性无显著提高，可促进小鼠适应株感染，提高病毒复制速率，促进临床症状的出现，但未能改变小鼠的死亡率。提高转基因小鼠年龄后，小鼠对病毒的敏感性显著降低，与野生小鼠相似，未能提高可感染EV71的小鼠的年龄门槛。模拟人自然感染状态下感染途径对转基因小鼠进行病毒感染，建立了灌胃感染EV71的小鼠模型，可在骨骼肌和脑中检测到病毒复制，但小鼠无明显症状。.结论：.完成了课题任务，达到了预期目标；建立了EV71的小鼠模型，为致病机制和防治研究提供了疾病模型和分析技术；建立了表达人EV71受体的转基因小鼠，体内验证了受体在促进EV71感染中的功能；本课题证明人EV71受体一定程度上可促进EV71感染小鼠，但推测其他因素在感染和致病中共同发生作用。