草鱼MHC经典基因抗病遗传机制的研究

草鱼是我国的主要淡水养殖品种之一，但其成活率低，抗病性差。本项目拟以我国不同水系的草鱼为研究对象，应用分子生物学及鱼病学的有关原理，采用RT-PCR、PCR-SSCP、克隆测序等技术，克隆草鱼MHC经典基因,探讨各基因座遗传多态和选择机制；通过对草鱼的攻毒，应用实时荧光定量PCR等技术，分析草鱼MHC的经典基因在组织中表达丰度，并探讨抗病性的强弱与等位基因组成差异；通过基因克隆，对相关的经典基因进行原核表达，采用SDS-PAGE和Western blot等技术检测各基因座蛋白表达。本研究对阐明草鱼MHC经典类基因的多态、进化机理和分子免疫机制具有重要的意义，并为进一步开展抗病育种以及疾病预防铺垫一定的基础。

草鱼是我国的主要淡水养殖品种之一，但其抗病性差，成活率低下。而主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）Ⅱ基因所编码的蛋白参与免疫过程中抗原呈递，为高度多态基因，且特定基因型与生物体抗病力相关。因此，本项目以草鱼为研究对象，成功克隆出草鱼MH-DAB的完整外显子2（276bp）。同时，项目分别用三种不同的常见致病病源：细菌（柱状黄杆菌、嗜水汽单胞菌）、寄生虫（多子小瓜虫）、草鱼出血病病毒对草鱼进行攻毒，在研究草鱼的病理学变化的同时，运用测序分析技术和统计学方法，获得12新等位基因，继而鉴定出草鱼的抗病与易感等位基因。进一步运用荧光定量的技术分析MH-DAB基因在正常组织中表达丰度及染病后的表达差异，揭示MH-DAB在免疫器官中所起的重要作用。最后，对南方草鱼出血病病毒（GCRV）进行流行病学调查，并且建立荧光定量RT-PCR 的方法，为GCRV早期诊断、定量分析以及流行病学监测提供科学依据，并且还能区分其病毒类型，更好地指导草鱼出血病的防治工作。本项目研究草鱼MH经典类基因的多态、进化机理和分子免疫机制，同时研究了GCRV的流行病学及检测方法，为进一步开展草鱼抗病育种以及疾病预防、监测奠定了学术基础，促进草鱼养殖业的健康发展。