miRNA在人类生物性体液中的法医学鉴定研究

Looking for a sufficiently effective and stable molecular genetics-based methods will show a director for the future human fluid identification in forensic science. microRNA, whose profiling of both conservative and tissue-specific characteristics, should be developed as a marker for the future fluid identification. Our research will take a large number of samples from Chinese Han ethic group as object of study, which including drying marks of forensically relevant biological fluids-blood, semen, saliva, vaginal secretions, and menstrual blood. Meanwhile, improved biological fluids RNA extraction method and miRNA gene chip were used to check the miRNA marker with identification significance. Relevant miRNAs were amplified and examined by RT-PCR technology. Then the data of △Ct values was gathered statistics (intersection between an amplification curve and a threshold line). On the one hand, the △Ct values were used to create two-dimensional (2D) scatter plots to identification of biological fluids, named two-dimensional miRNA body fluid identification assays. On the other hand, the △Ct values were analyzed by the phylogenetic software and phylogenetic trees were constructed by the neighbor-joining (NJ) method, which were used for identification of biological fluids. Combined use above two systems can specifically identify either fluid stain or mixture stain and may provide a promising solution to biological fluids identification for forensic casework.

寻求高效稳定的分子生物学方法对人类生物性体液进行鉴定，是法医物证学的发展方向，而miRNA具有保守性和组织特异性，可用于体液性质鉴定。本研究以中国汉族的血液、精液、唾液、阴道分泌液和月经血等5种体液的大量群体样本为对象，改进体液斑痕的RNA提取方法，利用miRNA基因芯片筛选，确定具有鉴定意义的miRNA位点。通过定量PCR，获得位点的△Ct值（目标基因与内参基因的循环阈值的差值）。通过这些基础研究可以建立：1.基于2种特定位点的△Ct值的组合，构建二维组合鉴定系统；2.以特定位点的△Ct值构建进化树，构建进化树鉴定系统。利用两种系统的联合应用，对斑痕检材和混合检材进行特异性鉴定，可以解决法医相关性体液的性质鉴定。

生物性体液是最重要的物证检材，而它们常以斑痕形式存在。传统的鉴定方法不能实现体液性质的复合鉴定（即通过一次实验对多种体液进行性质鉴定）。.miRNA具有保守性和组织特异性，可用于体液性质鉴定。如果能找到具有体液组织特异性的miRNA位点，无疑为体液性质鉴定的方法开创了新的技术路线。.本研究以中国汉族的血液、精液、唾液、阴道分泌液和月经血等5种体液和皮屑拭子的大量群体样本为对象，利用miRNA基因芯片筛选，确定具有鉴定意义的miRNA位点。通过实时荧光定量PCR，获得位点的△Ct值。以此作为数据基础，从而构建二维组合鉴定系统和进化树鉴定系统，对斑痕检材和混合检材进行特异性鉴定，为解决法医体液性质鉴定做出一定的基础贡献和应用研究。主要取得以下学术成绩：.1、完成了法医相关的5种体液和皮屑拭子的大量群体样本收集，为后续研究做好样本基础。.2、利用生物信息学和miRNA基因芯片，筛选出具有鉴定意义的miRNA位点。然后对这些位点进行荧光定量PCR实验，得到位点的Ct值和△Ct值，为下一步研究奠定数据基础。.3、改进RNA提取方法，以此解决法医实践中斑痕检材的RNA难以提取的问题，为今后相关研究奠定了一定的基础。.4、筛选出一系列具有体液性质特异性的miRNA位点，对建立中国汉族人群体液鉴定miRNA基因库进行了基础性工作。.5、初步构建了体液性质鉴定的二维组合鉴定系统：建立了5种体液对应的多组miRNA位点系统（每组由特定的2个miRNA位点构成），以此进行体液鉴定。经过实践应用，初步确认该系统的可行性。为后续研究提供良好的基础。.6、初步构建了体液性质鉴定的进化树鉴定系统：建立了5种体液对应的多组NJ树系统，以此进行体液鉴定。经过实践应用，初步确认该系统的可行性。为相关研究提供新的研究方向。.7、筛选能够鉴别月经血与外周血的miRNA位点，并且以此构建血液类样本的性质鉴定miRNA策略，为今后该领域的应用提供基础性研究。.8、对实时荧光定量PCR的两种定量方法（Taqman探针和SYBR Green染料）进行了对比研究，以此探讨不同定量方法对miRNA体液鉴定的影响，为相关研究的完备性提供基础性补充。.总之，在该项目的资助下，课题组在国际法医遗传学主流杂志上共发表SCI论文5篇，参加2次高水平的国际会议，协助培养硕士研究生1名。