基于ROS介导TGF-β/smad和NF-кB信号通路探讨白花丹醌抗肝纤维化的作用机制

Oxidative stress ROS are involved in the activation of HSC proliferation and collagen formation, promote liver fibrosis. Our previous study found that plumbagin effectively inhibited liver fibrosis through inhibiting the proliferation of HSC , induing apoptosis , reducing the of oxidative stress, and suppressing the TGF-β1 and NF-κB expression. However, it is still unknown the NOX mediated ROS generation and special signal pathsway involving ROS mediated TGF-β1/smad and NF-κB signaling pathway. Current study is designed to study plumbagin on ROS generation from NADPH oxidase in rat liver fibrosis , and key factor N0X4,P47phox,P67phox,P40phoxl expression as well asr ROS signaling pathways mediating HSC TGF-β1/smad and NF-κB core factors TGF-β,smad2 and smad3, p-IκBα、NF-κBp65 expression, and the influence of NF-κB nuclear transfer through the molecular biology and pharmacology in carbon tetrachloride composite factors of liver fibrosis animal model and TGF-β1stimulate primitive HSCs proliferation of rats model.It is expectative to illuminate the molecular mechanisms underlined in the protective effects of plumbagin on liver fibrosis . The research will provide more scientific basis for plumbagin antifibrotic new drug .

肝纤维化氧化应激ROS参与HSC活化、增殖、胶原形成促进肝纤维化发生。课题组前期研究发现白花丹醌（PL）具有抗肝纤维化作用，能抑制HSC细胞增殖、促进细胞凋亡、降低氧化应激水平并且抑制了TGF-β1和NF-кB的表达。但对氧化应激NOX介导ROS产生以及ROS介导的TGF-β/smad、NF-кB信号通路具体部位还不清楚。本课题构建四氯化碳复合因素肝纤维化动物模型和TGF-β1刺激大鼠原代HSCs 增殖细胞模型，应用分子生物学、药理学方法观察白花丹醌对大鼠肝纤维化NADPH氧化酶产生ROS以及信号通路关键因子N0X4、P47phox、P67phox、P40phoxl、 TGF-β1、smad2、smad3、p-IκBα、NF-κBp65 的表达以及NF-κB 核转位的影响，阐明PL影响ROS介导信号通路的具体环节，明确其作用靶点。为开发白花丹醌作为抗肝纤维化新药提供更多的科学依据。

ROS介导的氧化应激参与HSC的活化、增殖、胶原形成并促进肝纤维化发生。课题组前期研究发现白花丹醌（PL）具有抗肝纤维化作用，能抑制HSC细胞增殖、促进细胞凋亡、降低氧化应激水平并且抑制了TGF-β1和NF-кB的表达。但对PL影响氧化相关因子NOX的表达诱导产生ROS相关分子机制，以及PL作用于ROS介导的TGF-β/smad、NF-кB信号通路具体靶点还不清楚。本课题构建四氯化碳复合因素肝纤维化动物模型和TGF-β1刺激大鼠原代HSCs 增殖细胞模型，应用分子生物学、药理学方法观察PL对肝纤维化大鼠中影响NADPH氧化酶产生ROS，以及观察信号通路关键因子N0X4、P47phox、P67phox、P40phoxl、 TGF-β1、smad2、smad3、p-IκBα、NF-κBp65 的表达以及NF-κB 核转位的影响。实验结果证实PL的干预对大鼠肝纤维化有明显保护作用；PL通过降低肝组织中NF-κB的转录活性，抑制肝组织脂质过氧化作用，提高肝纤维化大鼠的抗氧化能力。此外，PL对活化的HSCs有明显的抑制作用。通过介导TGF-β1信号通路以及NF-κB炎症信号通路，从肝纤维化氧化应激与炎症反应的新视角阐明PL抗HSCs活化的分子机制。本研究为PL防治肝纤维化提供更全面的实验依据。此外，为开发和利用广西特色中药成分PL的抗肝纤维化作用提供较充分的实验和理论依据，达到了研究的预期目标。本研究期间共发表论文9篇（其中SCI收录5篇，中文核心期刊4篇），培养硕士研究生5名。