白花丹醌对肝纤维化HSEC的干预作用及其机制研究

肝窦内皮细胞（HSEC）不仅是肝窦的衬里,还具有多种分泌功能,肝纤维化后HSEC损伤导致分泌行为和细胞表型改变。最新研究表明,HSEC失窗孔化先于肝纤维化,并在去除肝毒素后可逆转。课题组在前期研究中发现民族药白花丹主要成分白花丹醌可促进肝星状细胞（HSC）凋亡和干预TGF-β1、PDGF等多种细胞因子分泌。由于肝纤维化发生机制的复杂性,推测白花丹醌除对HSC作用外,还可通过影响HSEC结构与分泌功能呈现抗肝纤维化作用。课题组提出"白花丹醌从HSC和HSEC两个方面参与肝纤维化的逆转作用"的假说。拟通过建立肝纤维化动物模型和HSEC模型,选择HSEC分泌的ET-1、VEGF、CTGF、uPA/tPA、ColⅣ、LM、Perlecan等因子和对HSEC超微结构改变作为检测指标来观测白花丹醌的干预作用,从HSEC新视角阐明白花丹醌治疗肝纤维化的分子机制,为中医药防治肝纤维化的基础研究提供新思路。

课题组基于前期的相关研究结果，提出“白花丹醌从HSC和HSEC两个方面参与肝纤维化的逆转作用”的这种假说，通过建立血瘀证肝纤维化复合动物模型及HSEC细胞模型，选择HSEC的微观结构，及其分泌的ET-1、VEGF、CTGF、ColⅣ、LM、Perlecan等细胞因子作为检测指标，观察以下项目：①肝纤维化动物模型形成过程中ET-1、VEGF、CTGF、ColⅣ、LM、Perlecan含量变化，及HSEC微结构的变化；以及HSEC细胞模型孵育的过程中，分泌行为和细胞表型的改变。组织到细胞两个层面结果的联合解读，能够揭示肝纤维化病理条件下HSEC的细胞结构变化与ET-1、VEGF、CTGF等细胞因子含量改变之间的关系，探讨肝纤维化肝内微循环障碍的形成机制及其物质基础，有助于深入研究肝纤维化的中西医结合病因病机学说。②通过研究白花丹醌和对照治疗组（秋水仙碱、丹参酚酸B）对肝纤维化动物模型和HSEC模型干预作用的不同效果，揭示和评价白花丹醌对不同模型中HSEC的结构及分泌功能的具体影响；全面阐述其对肝窦毛细血管化、肝内微循环障碍干预作用的效果。明确白花丹醌是否能成为针对ET-1、VEGF、CTGF等因子的拮抗剂或针对ColⅣ、LM、Perlecan等物质的抑制剂，从HSEC 的新视角探讨该药对肝纤维化干预作用的分子机制，为中医药治疗肝纤维化提供新思路和新靶点。本研究历时4年，完成了血瘀证肝纤维化动物模型的制备、检测及鉴定，药物干预后各组动物标本的采集、处理及检测；完成了细胞实验：HSEC的分离鉴定及培养，各组细胞与药物孵育，及细胞标本的采集、处理及检测；完成了动物模型和细胞模型的各组数据的结果处理、资料汇总及数据分析。实验结果证实了白花丹醌的活血化瘀、抗肝纤维化作用的机制除对HSC产生作用，进而影响MMPS活性之外，还通过影响HSEC结构（致使细胞基底膜形成和失窗孔化，导致肝脏微循环受损）及其分泌功能（分泌ET-1、VEGF、CTGF等多种细胞因子的能力）实现该药物从HSC和HSEC两个方面对肝纤维化病程产生干预作用。本研究结果较为充分揭示了白花丹醌的抗肝纤维化作用、抗肝窦毛细血管化作用的具体机制及作用靶位点。为开发和利用广西特色中药成分白花丹醌的抗肝纤维化、活血化瘀作用提供较充分的实验和理论依据。