壮药黄根抗肝纤维化有效成份及其对HSC与相关细胞因子表达的影响

Prismatomeris connata is one of the characteristic Zhuang medicine . The animal pre-test and clinical pre-test have Prompted that Prismatomeris connata can against liver fibrosis. Under the guidance of Traditional Chinese Medicine and Zhuang medicine theory, effective ingredients are used in the testing at the same time. Establishing liver fibrosis model of rat by CCI4 composite element, the extracts of Prismatomeris connata were used in the treatment of the model,and constrasted with Colchicine.Then detect the liver function with Automatic biochemical analyzer, such as TBIL、AST、ALT、A/G, detect the level of liver fibrosis by Radioimmunoassay,such as HA、PCIII、IV-C、LN ,and analyze the pathology change of liver and the degree of GIS.Observe the activation and apoptosis of HSC with MTT and the effect of Prismatomeris connata on α-SMA and related cytokines（TGF-β1、TNF-α、IFN-α、HGF） by Immunohistochemical technique and HD image analysis system. Probe into the effective ingredients of Prismatomeris connata Against liver fibrosis fibrosis from the molecular level and investigate its activity mechanism according to molecule level, which will provide scientific basis for the development and application of Prismatomeris connata against liver fibrosis.

黄根是我国壮医的特色药物之一。我们经临床与动物预初试验提示黄根有抗肝纤维化作用。本项目在中壮医理论指导下，应用黄根不同部位的提取物进行系统的抗肝纤维化有效成份筛选及其分子作用机理的研究。采用四氯化碳复合因素建立大鼠肝纤维化模型，给予黄根提取物治疗，并与秋水仙碱作对照。用自动生化仪检测肝功能：TBIL、AST、ALT、A/G；用放免法检测肝纤维化指标：HA、PCIII、IV-C、LN；用光镜观察肝脏病理学变化及GIS分期分级。同时用MTT法观察肝星状细胞（HSC）的增殖和凋亡情况，用免疫组化技术和高清晰图象分析系统观测对肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和相关细胞因子（TGF-β1、TNF-α、IFN-α、HGF）表达的影响，从整体、器官、细胞等多方面多层次探讨黄根的抗肝纤维化作用有效成份，从分子水平上探讨其作用机制，为黄根防治肝纤维化的开发应用提供科学依据。

本课题对壮药黄根（茜草科植物三角瓣花（Prismatomeris connata r.Z.Ruan）的根）抗肝纤维化有效成分及药理作用机理进行研究。包括有效部位的提取、有效部位抗肝纤维化体内实验、有效部位对肝星状细胞体外实验、有效成分的提取、分离与鉴定、有效成分抗肝纤维化体内实验和有效成分对肝星状细胞体外实验。通过对有效部位的体内外实验发现，乙酸乙酯部位对肝星状细胞的抑制作用随药物浓度的增长呈梯度增长；可诱导细胞发生早、中、晚期凋亡，乙酸乙酯部位组可降低肝纤维化大鼠肝脏系数和AST水平。由此判断黄根抗肝纤维化有效部位为乙酸乙酯部位。经对乙酸乙酯部位进行化学成分的分离、提取，共鉴定出7个化合物后，课题组进一步对东莨菪内酯进行抗肝纤维化体内实验，东莨菪内酯能保护肝纤维化大鼠肝脏，降低肝脏细胞外基质的水平，正向调控与肝纤维相关细胞因子，改善大鼠肝纤维化病变过程；而体外细胞实验结果提示，甲基异茜草素-1-甲醚可诱导肝星状细胞发生凋亡，对肝星状细胞增殖具有抑制作用，且具有剂量依赖性，而单体东莨菪内酯和甲基异茜草素对大鼠肝星状细胞表现出较弱的抑制作用和诱导凋亡的作用。完成上述研究对于阐明黄根及有效成分抗肝纤维化的作用机制，开发抗肝纤维化药物具有积极贡献。