基于TGF-β/smads与Ras/ERK信号通路探讨黄根东莨菪内酯抗肝纤维化的作用机制

Prismatomeris connata Y.Z.Ruan is one of the characteristic Zhuang medicine. Our previous studies have found Scopoletin from the root of Prismatomeris connata Y.Z.Ruan can effectively inhibit liver fibrosis in rat and regulate the expression of related cytokines positively. this study will base on the previous research, observe the effect of Scopoletin on TGF-β/smads and Ras/ERK signaling pathway in rat liver and on HSC-T6, analyze serum Pharmaceutical composition after Scopoletin by biotransformation , observe the inhibition and the apoptosis-inducing effect of drug containing serum on HSC-T6, and clarify molecular mechanisms and intervention rargets of Scopoletin anti-hepatic fibrosis from the perspective of the whole, tissue and cell. This study will provide scientific basis for the development and application of Prismatomeris connata Y.Z.Ruan against liver fibrosis.

黄根是我国壮医的特色药物之一。课题组前期研究发现黄根东莨菪内酯能有效抑制大鼠的肝纤维化，可调控与肝纤维化相关细胞因子的表达。本课题拟在前期研究的基础上，分析黄根东莨菪内酯在血液中的生物转化，结合含药血清对HSC-T6增殖的抑制作用与凋亡的诱导情况，深入研究黄根东莨菪内酯对肝纤维化大鼠肝组织及HSC－T6 TGF-β/smads与Ras/ERK信号通路的干预作用，从整体、组织、细胞等多方面多层次明确东莨菪内酯抗肝纤维化的分子机制与干预靶点。本课题将为黄根防治肝纤维化的开发应用提供科学依据。

本课题对黄根中东莨菪内酯单体的生物转化进行分析，结合含药血清对HSC-T6增殖的抑制作用与凋亡的诱导情况，研究东莨菪内酯对肝纤维化大鼠肝组织及HSC－T6 TGF-β/smads与Ras/ERK信号通路的干预作用。包括东莨菪内酯在大鼠肝微粒体系中代谢产物的分析实验、东莨菪内酯含药血清对大鼠肝星状细胞的增殖抑制与诱导凋亡实验、东莨菪内酯对肝损伤的保护实验、东莨菪内酯对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/smads与Ras/ERK信号通路的作用实验、东莨菪内酯对HSC－T6 TGF-β/smads与Ras/ERK信号通路的影响实验。通过大鼠肝微粒体系分析东莨菪内酯的代谢途径发现，东莨菪内酯主要代谢途径为脱甲基化和葡萄糖醛酸化反应；东菪内酯的含药血清对抑制HSC－T6增殖、诱导HSC－T6凋亡的作用均很弱；东莨菪内酯可减轻CCL4所致急性肝损伤的程度，具有较好的保肝作用；东莨菪内酯可调控肝组织TGF-β/smads通路表达，但不能调控HSC－T6中的TGF-β/smads通路，而无论对肝组织或是HSC－T6，东莨菪内酯对Ras/ERK信号通路干预作用均不明显。完成上述研究对阐明黄根中东莨菪内酯单体抗肝纤维化的分子机制，开发抗肝纤维化民间壮药具有积极贡献。