基于Sirt1-mTOR信号通路探究绝经后骨质疏松症“肾虚血瘀”病理机制研究

Postmenopausal osteoporosis (PMOP) is a systemic degenerative bone metabolism disease. Chinese medicine PMOP is most common with kidney deficiency and blood stasis syndrome. The pathological mechanism of PMOP kidney deficiency and blood stasis syndrome is still unclear, and there is no innovative Chinese medicine theory to explain. Our previous study found that the pathological mechanism of PMOP kidney deficiency and blood stasis syndrome is related to the abnormal expression of Notch and OPG/RANKL pathway. On this basis, we studied the BMSCs isolated from OVX rats and OVX rat spine. Related genes (Sirt1, mTOR, Atg5, LC3-I, LC3-II), kidney deficiency and blood stasis syndrome (ET-1, NO, E2), bone metabolism related indicators (BMD, ALP/TRACP, OPG/RANKL) expression The change is the core of the study, to explore the pathological mechanism of PMOP kidney deficiency and blood stasis syndrome, to explain the effect of abnormal autophagy level on bone metabolism of PMOP kidney deficiency and blood stasis syndrome, and to observe the effect of Chinese medicine for invigorating kidney and promoting blood circulation on prevention and treatment of PMOP, for the future research of Chinese medicine PMOP The mechanism provides theoretical basis and research ideas, and provides corresponding experimental data for the development of new drugs for PMOP.

绝经后骨质疏松症（PMOP）是全身退行性骨代谢疾病，中医PMOP以肾虚血瘀证最为常见，目前关于PMOP肾虚血瘀证病理机制尚不明确，且缺乏创新的中医理论加以解释。我们前期研究发现PMOP肾虚血瘀证病理机制与Notch、OPG/RANKL通路异常表达有关，在此基础上，本课题以OVX大鼠以及OVX大鼠脊柱分离培养的BMSCs为研究对象，以细胞自噬相关基因（Sirt1、mTOR、Atg5、LC3-I、LC3-II）、肾虚血瘀证量化指标（ET-1、NO、E2）、骨代谢相关指标（BMD、ALP/TRACP、OPG/RANKL）表达变化为研究核心，探究PMOP肾虚血瘀证病理机制本质，阐述自噬水平异常对PMOP肾虚血瘀证骨代谢的影响作用，并观察补肾活血中药对PMOP防治作用的效果，为今后研究中医PMOP发病机制提供理论依据及研究思路，同时为研制PMOP的新药提供提供相应的实验数据。

绝经后骨质疏松症（PMOP）是全身退行性骨代谢疾病，是社会老龄化必须面对的一个重大问题，中医学认为PMOP的发病与中医“肾藏精”理论相关，前期研究表明肾虚血瘀证PMOP的重要证型。本研究以去卵巢（OVX）大鼠及该模型大鼠脊柱分离培养的骨髓间充质干细胞（BMSCs）为研究对象，模拟绝经后妇女生理水平，以骨代谢相关指标（BMD、ALP/TRACP、OPG/RANKL）、肾虚血瘀证量化指标（ET-1、NO、E2）评估PMOP大鼠肾虚血瘀证模型，以细胞自噬相关基因（Sirt1、mTOR、Atg5、LC3-I、LC3-II）表达变化阐释自噬水平异常对PMOP大鼠肾虚血瘀证的骨代谢影响作用，并观察补肾活血中药对绝经后骨质疏松症防治作用的效果。现将研究结果昨简单概述：模型组大鼠股骨及脊柱BMD、血清ALP、OPG较正常组显著下降，而血清TRACP、RANKL水平较正常组升高，同时模型组大鼠NO、ET-1、E2水平较正常组水平下降，以上可验证PMOP大鼠肾虚血瘀证模型建立成功。补肾活血方组大鼠股骨及脊柱BMD、血清ALP、OPG较模型组显著升高，而血清TRACP、RANKL水平较模型组下降，同时补肾活血方组大鼠NO、ET-1、E2水平较正模型组水平下降。提示补肾活血方能够改善“肾虚血瘀”量化指标，提高骨密度，增加股形成，抑制骨吸收以补肾活血之法改善大鼠骨质疏松症病情。补肾活血方组大鼠骨与肾组织中Sirt1、Atg5、LC3-I、LC3-II表达较模型组显著升高，而mTOR表达较模型组下降。提示补肾活血方通过激活细胞自噬，从而起到防治绝经后骨质疏松症的作用。在细胞实验方面，我们研究发现，补肾活血方能够促进BMSCs增殖及成骨分化，其作用机制与上调Sirt1-mTOR通路中Sirt1、Atg5、LC3-I、LC3-II表达，下调mTOR表达从而激活细胞自噬相关。