利用ZFN技术建立FOXO3敲除猪研究卵巢早衰的发生

基因工程小鼠是卵巢早衰研究的动物模型。不过由于器官大小、解剖结构、生理代谢等方面与人类的差异，也由于采血困难，血量不足等原因，小鼠模型不能满足卵巢早衰研究需要。本课题拟选择解剖结构、免疫系统、心血管系统以及代谢等方面与人体具有高度相似性，并且易于反复采血的猪作模式动物，通过我们已经建立的结合基因合成和斑马鱼胚胎注射的ZFN筛选办法，利用我们的猪基因组改造平台，通过猪胚胎显微注射，建立FOXO3这一卵巢早衰密切相关转录因子的基因敲除猪。并利用这一突变猪作为卵巢早衰研究模型，进一步揭示卵巢早衰的发病机制，以及卵巢早衰发生过程中血液内各种生殖激素和基因表达的实时变化及其和卵巢早衰的相关性，以期发现血液内表达变化的卵巢早衰相关基因。

本研究拟通过建立FOXO3这一卵巢早衰密切相关转录因子的基因敲除猪。并利用这一突变猪作为卵巢早衰研究模型，进一步揭示卵巢早衰的发病机制，以及卵巢早衰发生过程中血液内各种生殖激素和基因表达的实时变化及其和卵巢早衰的相关性。项目的关键是猪基因工程模型的构建。原计划利用ZFN技术进行受精卵注射得到基因敲除猪，但由于ZFN技术不成熟，实验失败了。为此，我们开展了基于受精卵注射的CRISPR/Cas9基因敲除技术的开发，世界上第一个通过受精卵注射利用CRISPR/Cas9构建基因敲除小鼠，并成功地高效得到了基因敲除猪。已发表第一作者单位，通讯和共同通讯作者文章3篇。其中一篇被引用超过了200次。