SVCV反向遗传系统的构建及其传送分子疫苗机制研究

鲤鱼春季病毒血症（SVC）于2008年被我国农业部新定为鱼类一类疫病，其潜在的危害十分巨大。为了有效控制SVC，本项目拟对我国SVC病毒进行分离与签定，建立其核酸与蛋白检测技术；并对典型的SVC毒株进行全基因组测序，分析我国SVC病毒的分子特征；随后构建SVC病毒反向遗传系统，获得有标记的SVC弱毒株；通过进一步对拯救的SVC病毒进行分子遗传学修饰，获得具有可传送分子疫苗的重组SVC弱毒株。然后，采用SVC病毒-斑马鱼感染系研究SVCV弱毒株传送分子疫苗的作用机制。即集成反向遗传学技术、分子生物学与分子病毒学技术以及斑马鱼感染实验系获得SVC弱毒疫苗侯选株；并进一步发挥其传送分子疫苗的作用。研究结果将为控制SVC这一鱼类一类疫病的爆发提供强有力的免疫预防手段。同时，也可另劈一条传送分子疫苗的途径、解决鱼类有疫苗但在生产上难以应用这一棘手的学科重大问题。

为了对鲤鱼春季病毒血症病毒（SVCV）进行有效地预防。本项目构建了SVCV反向遗传系统元件，为其反向遗传操作平台的建立打下了坚实的基础。对SVCV全长进行了分段克隆测序，并且通过3’RACE和EST测序技术测定了SVCV两端序列，SVCV全长测序为准确构建反向遗传系统提供参考。分别构建了原核拯救系统（SVCV-pBS，N-pBS，P-pBS，L-pBS）与真核拯救系统（SVCV-pVAX，N- pVAX，P- pVAX，L- pVAX），并且采用了磷酸钙转染法和脂质体转染法，分别转染鲤鱼上皮瘤细胞（EPC）、草鱼卵巢细胞（CO）进行多次拯救SVCV。进行盲传未发现明显细胞病变，但电镜初步看到了拯救SVC病毒，5类蛋白基因的RT-PCR也有过阳性结果。本研究虽还难以证明SVCV株的反向遗传操作平台是否完全可靠，但为进一步研究SVCV反向遗传学提供参考和借鉴。