环状芽胞杆菌半纤维素酶基因的克隆和结构与功能研究

采用功能互补法，从芽胞杆菌BT-7的基因组文库中，筛选到多个具水解木聚糖功能的阳性克隆。对这些克隆进行的限制酶作用和Southern杂交显示，它们分属三类不同的基因。克隆PBX3酶活性较高，对其进行的基因定位、次克隆和双向测序与比较分析发现：BX3中的3.9kb片段包括了基因的功能区，且赤在Genbank中找到它的同源性序列，初步判段为一个新发现的内切木聚糖酶基因。同时，所有的三个克隆均能在大肠杆菌中正确表达和将酶蛋白分泌到胞外，胞外和胞周间质的酶活力点总活力的80%左右。利用聚丙烯酰胺凝胶申泳，结合酶活性染色，确定了被克隆到的木聚糖酶基因表达出的酶蛋白在对应的出发菌株中的木聚糖酶组分。另外两个基因的测序和分析比较工作还在进行之中。