HPLC-MS/MS内标法研究典型污染物对人体DNA甲基化的影响

环境污染物如何诱导人体疾病的产生和发展是一个普遍关注的问题，传统的遗传毒理学已经不能完全解释环境污染物对人体早期健康效应的影响机制，DNA甲基化的改变，已被认为是疾病发生早期的一个重要的生物事件，可以用来评价环境污染物对人体早期健康效应的影响。本项目旨在本课题组已有研究成果的基础上，利用高效液相色谱双质谱联用技术（HPLC-MS/MS），筛选出一种合适的化合物作为内标，建立目前检测全基因组DNA甲基化较准确、灵敏、快速的方法，即HPLC-MS/MS内标法；并利用该方法来检测典型环境污染物苯和三氯生对人体肝细胞全基因组DNA甲基化改变的影响，初步从表观遗传学的角度，探讨环境污染物对人体早期健康效应的影响。该项目的完成，可望在环境污染物对人体早期健康效应的甲基化检测方面取得新的进展，对环境污染物表观遗传毒理学研究具有一定意义。

环境污染物如何诱导人体疾病的产生是一个普遍被关注的问题，人体内DNA甲基化水平的失调被用来预测人体疾病的发生和发展的过程，特别是早期健康效应的发生和发展。本项目针对典型环境污染物苯和三氯生，建立HPLC-MS/MS检测全基因组DNA甲基化和羟甲基化的方法，探索了这两类化合物对人体细胞的DNA甲基化影响及其可能的发生机制。研究结果表明：（1）苯的代谢物中的氢醌和1，4-苯醌诱导了肝细胞的全基因组DNA甲基化降低，但不是通过调控DNA甲基化酶的途径引起的，这两种化合物对苯毒性的贡献较大；（2）三氯生诱导了人体肝癌细胞的全基因组DNA甲基化水平降低，其发生机制可能是通过抑制了DNA甲基化酶和甲基化DNA结合蛋白的表达，和增强了氧化应激产物8-羟基鸟苷水平；同时数据表明雌激素受体1的启动子DNA甲基化水平升高，这些都可能是三氯生肝毒性的发生机制。