hNSCs在MS中对CD4+T细胞DNA甲基化和免疫调控研究

Multiple sclerosis (MS) is a central nervous system demyelinated autoimmune disease, mainly due to the CD4 + T cell function caused by imbalance, and this imbalance may be DNA methylation caused by abnormal regulation. The poor treatment. People neural stem cells (hNSCs) besides have already clear myelin repair damage effect, it may also have immune regulation function, is expected to be an ideal choice for the treatment of MS. We found that the type of the hNSCs CD4 + T cells can reerse the unbalanced state function, improve the CD4 + T cells genomic DNA methylation overall level, reduce EAE mice inflammatory reaction, but the molecular mechanism still is not clear. This topic is (1) trained through in vitro, and connecting with the express spectrum analysis and siRNA interference chip technology, looking for hNSCs and validation of CD4 + T cells, immune regulation mechanism; (2) an epigenetic immune pedigree analysis technology immune regulation mechanism and clear DNA methylation, control mechanism, the relations of the (3) hNSCs nasal implanted EAE in mouse models, validation. This topic hNSCs tries to reveal the immune regulation mechanism may, clear its dual role of MS treatment, for hNSCs neuroimmune disease treatment in the application to provide new basis and targets.

多发性硬化（MS）是一种中枢神经系统脱髓鞘自身免疫疾病，主要由于CD4+T细胞功能失衡造成，而这种失衡可能是DNA甲基化调控异常所致。现行治疗方法疗效欠佳。人神经干细胞（hNSCs）除了具有已明确的修复髓鞘损伤的作用，还可能具有免疫调控作用，有望成为治疗MS的理想选择。我们的预实验发现hNSCs可逆转CD4+T细胞的功能失衡状态，提高CD4+T细胞基因组DNA总体甲基化水平，减轻EAE小鼠炎症反应，但分子机制尚不清楚。本课题拟①通过体外共培养，并结合表达谱芯片分析和siRNA干扰等技术，寻找和验证hNSCs对CD4+T细胞的免疫调控机制；②采用表观遗传免疫谱系分析等技术明确免疫调控机制与DNA甲基化调控机制的关系；③hNSCs经鼻植入EAE小鼠模型进行体内验证。此课题力图揭示hNSCs的可能免疫调控机制，明确其对MS的双重治疗作用，为hNSCs在神经免疫疾病治疗中的应用提供新的依据和靶点。

该课题主要明确了NSCs对CD4+T细胞功能及分化的影响；明确了参与诱导关键分子表达的信号途径及激活该途径所需要的细胞因子；对MS患者血液及脑脊液CD4+T细胞进行单细胞RNA和甲基化测序，明确了多基因遗传以及表观遗传学在MS的发病中的作用。. 我们认为：1.T17/T1亚群的异常增殖和分化与多发性硬化的发病有关。NSCs活化的Th1所产生的IFN-γ等细胞因子分泌PGE2，从而抑制实验性致脑炎CD4+T细胞的增殖以及分化为TH17亚群，同时还促进凋亡以及调节性T细胞的增殖。研究提示神经干细胞起到了负向调节T细胞的作用，从而可能存在治疗神经系统自身免疫疾病的作用。此外，神经干细胞除了有直接替代修复，分泌细胞因子调节T细胞功能的作用外，还可以通过与受损细胞直接接触，建立TNT隧道纳米管，输送线粒体及细胞质的作用，起到修复细胞的作用。2.RIF提示IKZF1、BACH1，CEBPB,EGR1，FOS在多发性硬化病理机制中可能起到主要控制基因表达的作用。我们的研究证实了在多发性硬化中多分子的改变，并且提示在多发性硬化的病理机制中存在的一些可能的预测因子。3.MS患者复发期CD4+T细胞甲基化显著低于正常对照。在童真CD4+T细胞中已有一些亚群显示其甲基化状态的差异，其内在调控机制有待测序数据结果分析。