高效转导猪源细胞腺病毒Pt-Dd的筛选及其对猪亚单位疫苗免疫增强作用

Adenovirus Penton Base and Fiber can automatically assemble into Penton-dodecahedron (Pt-Dd) virus-like particles, which can efficiently enter a variety of cells through a receptor-mediated pathway and can be used as a tool for intracellular transduction. This function of the Pt-Dd received extensive attention in gene therapy researches. Recently researchers found that the Pt-Dd can also be used to deliver vaccine antigens, and which can assist antigen to active CTL response. Here, we will select Pt-Dd from different serotypes, tissue tropism and animal sources adenoviruses for efficient transduction pig cells. And then we will analysis the antigen presenting pathway of the antigens with Pt-Dd by monocyte-derived dendritic cells as antigen-presenting cells (APC). At last, PRRSV GP5 will be used as target proteins and the immune responses of these proteins with Pt-Dd will be detected to analysis the immune-enhance effect of Pt-Dd . These results will provide useful information for develop Pt-Dd base porcine subunit vaccine in future.

由腺病毒五邻体基部蛋白（Penton Base）和纤突蛋白（Fiber）组装成的五邻体十二面体（Pt-Dd）病毒样颗粒能够通过受体介导的途径高效进入多种细胞，可作为转运工具向细胞内转运外源蛋白。最近发现Pt-Dd的入胞作用可用于转运疫苗抗原，并且能够辅助抗原激活特异性CTL反应。为将Pt-Dd用于猪亚单位疫苗研究，本项目分析不同血清型、组织嗜性及动物源的腺病毒Pt-Dd的稳定性、抗原携带能力及对猪源细胞的转导能力，筛选适合用于猪亚单位疫苗研究的Pt-Dd；以猪单核细胞诱生的树突状细胞为抗原递呈细胞（APC）模型，分析在该Pt-Dd作用下APC的抗原递呈路径，揭示Pt-Dd免疫增强作用的分子机制；以PRRSV GP5蛋白为靶抗原，在仔猪体内分析Pt-Dd作用下GP5的免疫效果，并用攻毒试验进行验证，系统分析Pt-Dd对亚单位疫苗的免疫增强作用，为Pt-Dd用于新型猪亚单位疫苗研究奠定基础。

由腺病毒五邻体基部蛋白（Penton Base）和纤突蛋白（Fiber）组装成的五邻体十二面体（Pt-Dd）病毒样颗粒能够通过受体介导的途径高效进入多种细胞，可作为转运工具向细胞内转运外源蛋白。Pt-Dd的入胞作用可用于转运疫苗抗原，并且能够辅助抗原激活特异性CTL反应。为将Pt-Dd用于猪亚单位疫苗研究，我们分析人Ad3、Ad9、Ad41及猪Ad3和牛Ad3的表达情况，根据表达量的多少，我们筛选了表达量较高的牛Ad3作为研究对象；随后我们通过肽扫描技术，对PRRSV的多个抗原进行了抗原表位分析，以筛选出适合penton 转导的抗原区域，我们发现在GP3上存在一个强的抗原反应区域，而GP4上的一个关键位点可以影响GP4的抗原性，对GP5的分析结果显示，GP5的主要抗原区集中在C端，而非预测的N端，这些结论为Penton介导的亚单位疫苗抗原区定位奠定了基础；最后我们以penton-EGFP为研究对象，研究了penton-EGFP口服后通过胃酸屏障，转导肠上皮细胞及提升靶抗原免疫效果的情况，结果显示penton/抗原复合体能够突破胃酸屏障，成功进入小鼠肠道，penton-EGFP能够成功被转导进入小鼠肠道上皮细胞，抗体检测分析发现，penton-EGFP免疫小鼠，血清抗体高于只免疫EGFP的小鼠，显著提高EGFP蛋白的免疫效果。这些研究结果为penton基础的亚单位疫苗研究奠定了良好的基础，具有较好的开发应用价值。