基因调控PRKCD和ASK对门静脉高压症脾亢脾Mφ生物学功能的影响

脾Mφ吞噬破坏血细胞增多被认为是门静脉高压症（PHT）脾亢发病的重要环节。本课题前期工作（NSFC资助）已开展"人脾脏MΦ的分离与纯化"、"人脾脏Mφ总RNA的提取和产率研究"、"基因芯片筛选PHT脾亢脾和正常脾Mφ中差异表达的基因"等系列研究。应用基因芯片首次成功筛选出PHT脾亢脾Mφ和正常脾Mφ间的差异表达基因（121条），发现表达明显下调的PRKCD（编码蛋白激酶Cδ）和表达明显上调的ASK（编码DNA合成期激酶活性因子）与Mφ功能密切相关。但PRKCD和ASK能否作为治疗脾亢的靶基因，尚需进一步研究证实。本课题拟采用慢病毒载体为介导，结合基因转导技术上调PHT脾亢脾Mφ内PRKCD基因表达，利用RNAi技术下调ASK基因表达，并对脾Mφ生物学功能的变化进行研究，旨在深入探讨两种基因在脾亢发生中的作用，期望能为PRKCD和ASK作为脾亢的基因治疗靶点提供理论依据。目前尚未见类似报道。

脾巨噬细胞（macrophage，Mφ）吞噬破坏血细胞增多被认为是PHT脾亢发病的重要环节。前期研究显示，在脾亢脾Mφ，PRKCD（protein kinase C, delta，负责编码蛋白激酶Cδ）表达明显下调；ASK1（activator of S phase kinase，负责编码DNA合成期激酶活性因子）表达明显上调，据此我们推测这两个基因与Mφ功能密切相关。本课题通过诱导U937分化，建立巨噬细胞模型，并通过慢病毒介导拟上调PRKCD的表达，同时下调ASK1的表达，以反向验证这两个基因的表达是否影响Mφ的功能。结果显示，PRKCD过表达能显著减弱巨噬细胞的吞噬功能，进一步检测发现其过表达能明显降低胞质中酸性磷酸酶的表达，提示这可能与胞内溶酶体活性降低有关，其具体分子机制有待进一步探索。然而我们未能成功达到ASK1干扰的效应，故未针对该基因进行后续试验。