NF-κB非经典途径活化门静脉高压症脾亢脾巨噬细胞的分子机制研究

The mechanism of hypersplenism due to portal hypertention is unclear. Our prior studies have indicated that the activation of TLR4 of splenic macrophage play an important role in hypersplenism and the p65 and c-Rel subunit of NF-κB translocate to the nucleus. To inhibit NF-κB activation, p65 siRNA and c-Rel siRNA are used to treat normal and hypersplenism splenic macrophage. NF-κB p65 and c-Rel downstream target genes are evaluated in untreated and treated cells by cDNA microarray and quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction. Then target genes siRNA are used to treat normal and hypersplenism splenic macrophage.The phagocytosis, metabolism, angtigen presentation and secretion of splenic macrophage are evaluated in untreated and treated cells. Our studies will provide insight into the mechanism of hypersplenism and potential therapeutic targets for treatment of hypersplenism.

肝硬化门静脉高压症（PH）脾亢的发生机制仍不清楚。我们研究发现："脾脏巨噬细胞（MΦ）Toll样受体活化→MΦ吞噬破坏血细胞增多" 可能是脾亢发生机制之一；Toll样受体通路下游核转录因子NF-κB亚基 p65、 p52和c-Rel入核活化，NF-κB亚基p65和c-Rel活化可增强PH脾亢脾MΦ NF-κB亚基p65和c-Rel的吞噬和分泌功能。阻断p65和c-Rel，用基因芯片筛选p65和c-Rel调控的靶基因，并研究筛选出的基因功能，明确NF-κB所调控的与脾亢相关的靶基因及其功能。为阐明脾亢的发病机制提供依据，为开发脾亢的分子治疗提供参考。

背景与目的：尽管肝硬化门静脉高压症（portal hypertension，PH）脾亢的发生机制仍然不清楚，但脾脏巨噬细胞吞噬破坏血细胞增多被认为是其发病的重要环节。本课题组研究发现“脾脏巨噬细胞NF-κB p65/c-Rel二聚体活化可能是PH脾亢发病机制的重要环节之一”。然而p65/c-Rel二聚体下游的靶基因及其功能尚无文献报道。方法：选取肝硬化PH脾功能亢进患者19例(脾亢组)，外伤性脾破裂患者3例(对照组)，收集其手术切除的脾脏标本，采用贴壁法分离培养脾脏巨噬细胞。用小干扰RNA抑制p65、和c-Rel，并用荧光实时定量PCR检测NF-κB下游靶基因的表达水平。用小干扰RNA抑制IFN-γ的表达，检测脾脏巨噬细胞的吞噬功能。结果：脾亢脾脏巨噬细胞NF-κB p65亚基被p65 siRNA抑制后，IL-1α，IL-1β，IFN-γ，TGF-β1和TNF-α的mRNA表达明显下调（P<0.05）。脾亢脾脏巨噬细胞NF-κB c-Rel亚基被c-Rel siRNA抑制后，IL-1α，IL-1β，IFN-γ，TGF-β1和TNF-α的mRNA表达明显下调（P<0.05）。脾亢脾脏巨噬细胞IFN-γ被IFN-γsiRNA抑制后，巨噬细胞的吞噬率明显下降（P<0.05）。结论：IL-1α，IL-1β，IFN-γ，TGF-β1和TNF-α是p65/c-Rel下游的靶基因，IFN-γ促进PH脾亢脾巨噬细胞的吞噬功能，IFN-γ上调可能是PH脾亢发病机制的重要环节之一。