多酚类植物化学物EGCG及PC-B2对AFB1致肝细胞损伤的干预研究

The corn and peanut oil are principal food or cooked oil for the minortity group in Guangxi province,Which leads to a high exposure levels of AFB1. Liver cancer become one of very serious illness in these area. The prevention and curation of liver cancer has vigorously practical significance. Our studies will choose two kinds of polyphenols (EGCG,PC-B2）as main materials of research, which are rich in resources and have broad bioactivty. Some intervention experiments in vivo or in vitro ,using rat hepatocytesand nornal human embryonic hepatocytes as target cells, Using AFB1 with obvous liver toxicity and strong carcinogens as toxicant, will be performed through morphological observation, metabolic enzyme change of I phase and II phase, oxidation damage, repair of damaged DNA, cell apoptosis, Oncogenic mutations and tumor-suppressor gene, and so on. As well as, the intervention, protective effect and mechanism of the two kinds of polyphenols independently or in combination will be analysised . In a all, these studies will be sever disease prevention and train medical personnel for Guangxi area.

地处亚热带的广西，气候温暖潮湿，霉菌易于生长繁殖，在当地居民经常食用的玉米、花生油等多种食物中，AFB1污染量明显较高，致使肝癌成为严重危害广西各族人民群众身体健康的重大疾病之一，积极开展其防治工作具有重要的现实意义。本课题拟选我国资源丰富、具有广泛生物学作用和较好功效的2种多酚类植物化学物（EGCG、PC-B2），从体内外实验二方面，以大鼠肝细胞和正常人类来源胚胎肝细胞为靶细胞，用有明显肝毒性的强致癌物AFB1为染毒物，在其致肝细胞DNA损伤的界面上，从形态学观察、Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶变化、氧化损伤、受损DNA的修复、细胞调亡与癌基因及抑癌基因表达的关系方面进行干预研究，分析EGCG和PC-B2单独和联合应用后对化学性肝细胞DNA损伤的干预作用、效果和机制，为广西少数民族地区的疾病预防控制和医学人才培养服务。

研究表明，植物化学物具有良好而广泛的生物学作用，但多酚类植物化学物中表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和原花青素B2（PC-B2）是否有较好拮抗强致癌物AFB1对肝细胞的损伤尚未见报道。我们从细胞和动物实验二方面，探讨了EGCG和PC-B2对AFB1致肝细胞损伤的干预作用、效果和机制。.细胞实验：（1）AFB1在10~80μg/ml内对人胚肝细胞（L-02细胞）生长呈剂量依赖性抑制作用，能明显抑制细胞生长、引起DNA损伤、促进其凋亡，用30~40μg/mlAFB1可构建较好的L-02细胞损伤研究平台；（2）EGCG在25μg/ml时有明显促进L-02细胞生长作用。用10、30μg/ml EGCG干预AFB1对L-02细胞的影响，结果显示，EGCG可促进细胞线粒体膜电位的恢复，下调诱导细胞凋亡基因的相对表达，提高细胞存活率、减少细胞凋亡；（3）PC-B2在5~75μg/ml具有较好的促进L-02细胞生长作用。用3、10和30μg/ml的PC-B2来干预AFB1对L-02细胞的影响，结果显示，PC-B2不仅可提升细胞抗氧化能力（增加SOD、GSH-PX活性，减少MDA和8-OHdG含量，抑制CYP1A2和CYP3A4酶活力及其相应基因表达），还通过调控相关基因表达（促进DNA修复基因hOGG1表达、提高bcl-2/bax比值）达到较好的干预作用；（4）用EGCG+PC-B2联合干预AFB1对L-02细胞的影响。结果显示，EGCG+PC-B2联合干预能下调细胞凋亡基因的表达，降低DNA损伤与细胞凋亡率，提高细胞的生存率。.动物实验：选雄性SD大鼠，用EGCG（25mg/kg，100mg/kg）和PC-B2（30mg/kg）灌胃7天，中途以AFB1腹腔染毒（2mg/kg）1次，取鼠血及肝组织进行检测。结果显示，经AFB1染毒后，可构建大鼠急性肝损伤模型，用EGCG和PC-B2干预能明显减少AFB1对大鼠肝脏的病理性损伤，改善肝功能、减少氧化损伤、降低炎症程度、阻止细胞凋亡。.总结：在一定剂量下，EGCG和PC-B2可通过抗氧化、抗DNA损伤、抑制细胞凋亡基因表达等机制拮抗AFB1对肝细胞的损伤作用，并促进肝细胞修复与生长。显示这2种多酚类植物化学物具有较好的保肝护肝、拮抗致癌物AFB1致肝细胞损伤的作用。