蜂蜜花源酚类标记物与酚类对DNA氧化损伤的保护机制

Phenolic compouns ,including flavonoids and phenolic acids,are the main bioactive compoents of honey, which exhibit high antioxidant activity. Some phenolic compounds can be considered as floral markers of honeys. Linden tree honey, vervain family honey and longan honey are the main monofloral honeys of China, however, there is limited research on the structural characterization of their antioxidants and antioxidant activities. In this study, we will characterize the structure of phenolic compouns of three monofloral honeys and evaluate the protective action of these honeys and their antioxidant phenolic compounds on peripheral lymphocyte DNA and pBR322DNA damage induced by reactive oxygen species. The findings will help to understand the structure of antioxidants of three monofloral honeys and their roles in the botanical origin of chinese monofloral honey and preliminarily reveal the protective mechanisms of these honey and their antioxidants on the oxidative DNA damage and in vivo antioxidant activity. The results will provide the evidence for the floral markers of honey, and also provide the new antioxidant resource from honeys. It is also important to develop the antioxidant honey product and elucidate the pharmacological activity of honeys.

酚类化合物是广泛存在于蜂蜜中的一类有机化合物，具有较高的抗氧化活性。已有研究表明，酚类化合物可以作为单花种蜂蜜的花源标记物，因而引起了研究者的关注。中国拥有较多的单花种蜂蜜，但对其花源标记物、酚类化合物的结构、抗氧化活性及抗氧化机制了解较少。本研究应用有机分析的方法，表征椴树蜜、荆条蜜及龙眼蜜中主要酚类化合物的结构；采用指纹图谱技术确定3种单花种蜂蜜花源的酚类标记物；以活性氧诱导人体外周淋巴细胞DNA和pBR322DNA损伤为模型，评价3种蜂蜜酚类化合物对活性氧致DNA氧化损伤的保护作用，探究其保护机制，从而筛选高抗氧化活性的酚类化合物。研究结果将为蜂蜜溯源及质量控制提供依据，同时为高活性天然抗氧化剂提供新的开发资源，对蜂蜜的加工利用及深入认识蜂蜜的中药药理活性具有重要意义。

酚类化合物是广泛存在于蜂蜜中的一类有机化合物，具有较高的抗氧化活性。已有研究表明，酚类化合物可以作为单花种蜂蜜的花源标记物，因而引起了研究者的关注。中国拥有较多的单花种蜂蜜，但对其花源标记物、酚类化合物的结构、抗氧化活性及抗氧化机制了解较少。本研究应用有机分析的方法，表征椴树蜜、荆条蜜及龙眼蜜中主要酚类化合物的结构；采用指纹图谱技术确定3种单花种蜂蜜花源的酚类标记物；以活性氧诱导小鼠外周淋巴细胞DNA和pBR322DNA损伤为模型，评价3种蜂蜜酚类化合物对活性氧致DNA氧化损伤的保护作用，探究其保护机制，从而筛选高抗氧化活性的酚类化合物。主要研究结果如下：.1. 建立了蜂蜜中酚类化合物的HPLC-ECD(电化学检测）分析新方法，该方法具有选择性强、灵敏度高等特点；在此基础上构建了龙眼蜜、荆条蜜、椴树蜜、枣花蜜、洋槐蜜、油菜蜜、枸杞蜜及苕子蜜等8种单花种蜂蜜的HPLC-ECD指纹图谱，结果发现，丁香酸、p-香豆酸、阿魏酸、对羟基苯甲酸可以作为龙眼蜜的花源标记物；原儿茶酸、对羟基苯甲酸和咖啡酸可以作为荆条蜜的花源标记物；高良姜素、山柰酚和橙皮素均可以作为椴树蜜的花源标记物；.2. 采用HPLC-ECD指纹图谱结合化学计量学，能够有效地鉴别单花种蜂蜜的花源；在油菜蜜中发现了一种分子量为362的特征化合物，利用该化合物结合指纹图谱，能够鉴别在洋槐蜜、苕子蜜和椴树蜜中掺入5%的油菜蜜，本研究将为蜂蜜溯源、掺假及质量控制提供依据。.3. 采用pBR322质粒DNA研究蜂蜜对氧化应激引起DNA损伤的保护机理，结果发现荞麦蜜、枣花蜜均能有效抑制羟基自由基介导的DNA链的断裂及开环。这种保护效果与酚类化合物的含量有关。荞麦蜜在定位体系中的保护作用强于非定位体系，表明荞麦蜜主要通过清除自由基和还原能力发挥对DNA的保护作用。通过原子力显微镜观察发现，蜂蜜能够有效修复被破坏的DNA三级结构。彗星实验结果表明，蜂蜜中酚类化合物能够进入淋巴细胞内部，通过络合细胞内Fe2+或清除H2O2保护DNA。同时，动物实验证明，蜂蜜中的酚类化合物经过代谢进入机体，提升小鼠淋巴细胞抗氧化能力。此外，我们研究发现枣花蜜能够显著上调HepG2肝癌细胞p53蛋白表达，上调Bax表达，活化caspase3，caspase8，caspase9信号分子，因此枣花蜜促进HepG2细胞凋亡。