基于p53/Bak介导的线粒体凋亡通路研究耳聋左慈丸对C57BL/6J小鼠老年性聋的作用及机制

老年性聋是由于衰老造成的听觉系统功能退化，在老年人中发病率很高，约占30%-70%，是仅次于关节炎和高血压的常见慢性疾病，严重影响老年人的生活质量，并可能诱发老年痴呆等多种疾病。由于这种听觉损害的不可逆性，其预防比治疗更有意义，因此，传统中医药在"治未病"方面的优势使其成为防治老年性聋的重要手段。.中医认为衰老的本质是肾虚，基于中医肾主耳理论，本项目选用经典补肾方剂耳聋左慈丸，观察其对C57BL/6J小鼠年龄相关性听力损失和内耳损害的作用，并从细胞凋亡角度探讨其作用机制。线粒体凋亡途径是老年性聋细胞凋亡的重要机制，本项目观察p53/Bak介导的线粒体凋亡通路在小鼠老年性聋发生中的作用，并探讨耳聋左慈丸通过调控该通路延缓小鼠老年性聋发生的作用机制，为临床老年性聋的防治以及中医肾主耳理论的研究提供有价值的实验依据。

老年性聋是由于衰老造成的听觉系统功能退化，在老年人中发病率很高，严重影响老年人的生活质量，并可能诱发老年痴呆等多种疾病。因此，老年性聋发病机制以及防治手段的研究对于提高老年人的健康水平和生活质量有重要的价值。传统中药复方耳聋左慈丸在临床上用于肾虚耳聋耳鸣的治疗，但有关其药理机制研究较少，尚没有耳聋左慈丸对老年性聋作用的研究报道。本研究采用HPLC法对实验中使用的耳聋左慈丸水煎剂进行成分分析和质量控制。采用脑干诱发电位（ABR）检测听功能，石蜡切片、HE染色观察耳蜗毛细胞和螺旋神经节的形态和数量， TUNEL法观察耳蜗毛细胞和螺旋神经节凋亡情况，透射电镜观察耳蜗细胞线粒体形态和数量的异常改变，实时定量PCR检测p53, Bak, caspase-3和caspase-9基因表达的变化。ABR结果显示，耳聋左慈丸可降低老年性聋小鼠上升的听阈值，表明耳聋左慈丸具有改善老年性聋小鼠听功能的作用。HE染色后的形态学观察显示，耳聋左慈丸可以改善老年性聋小鼠耳蜗毛细胞的缺失和螺旋神经节细胞的损伤。TUNEL法检测结果显示，与对照组比较，老年性聋组TUNEL阳性细胞显著增加，耳聋左慈丸给药组TUNEL阳性细胞则有所减少，提示耳聋左慈丸有抑制细胞凋亡的作用。透射电镜观察结果显示，老年性聋组耳蜗细胞线粒体数量明显减少，并呈现肿胀、空泡等形态改变，耳聋左慈丸组正常线粒体的数量明显增加，提示耳聋左慈丸可以抑制线粒体的损伤。实时定量PCR结果显示，耳聋左慈丸可以抑制老年性聋小鼠升高的p53, Bak, caspase-9 和caspase-3基因表达水平。综上可得出以下结论，耳聋左慈丸可以通过抑制p53/Bak通路介导的线粒体凋亡减轻耳蜗毛细胞和螺旋神经节细胞的损伤，抑制C57 BL/6J小鼠老年性聋的发生。本项目研究成果不仅为老年性聋的发病机制研究以及临床老年性聋的防治提供新的实验数据，并且为中医肾主耳理论的现代生物学基础研究提供了新的实验依据。