HIF-1α调控Th17/Treg平衡在HBV宫内感染免疫耐受中的作用及机制研究

HBV infection in early life is apt to chronic, immune tolerance is the main mechanism, whereas the cells and molecular mechanisms about immune tolerance have not yet been fully elucidated. Our team (No.30872780) have identified that the interaction heterogeneity between virus and host which is involved in the pathophysiology of HBV intrauterine infection. We further discuss the mechanisms of HBV intrauterine infection from the host's immune. Current studies suggest that HBV maternal-fetal interface of Th17/Treg polarization imbalances, may be directly involved in the formation of tolerance, and HIF-1α is one of the key transcription factors which controlled the balance of Th17/Treg in mice. So we presume: the formation of immune tolerance was resulted from the polarization of Th17 and regulating the balance of Th17/Treg which is induced by HIF-1α in placenta microenvironment.This study intends to examine the role of HIF-1α in the positive regulation of Th17 cell by RORc and the inhibition of Treg cells by Foxp3 in the molecular regulation of Th17/Treg balance. We demonstrate the controlling mechanism of HIF-1α in the balance of Th17/Treg in the human placental microenvironment in vitro cell culture polar model, by flow cytometry cell sorting and chromatin immunoprecipitation, which may clarify the importance of HBV intrauterine infection by Th17/Treg balance immune tolerance , it will provide new targets for clinical early diagnosis and treatment of HBV intrauterine infection.

免疫耐受是宫内感染HBV易慢性化的主要机制，但其细胞及分子机制尚未完全阐明。前期研究发现宫内感染是病毒和宿主相互异质性作用的结果，引导我们从机体免疫方面进一步探讨HBV宫内感染机制。有研究提示HBV孕妇母胎界面Th17/Treg极化失衡，而HIF-1α是参与调控小鼠该平衡的关键转录因子。故推测：胎盘微环境中HIF1α诱导Th17极化进而调控Th17/Treg平衡，导致HBV宫内感染的免疫耐受形成。本研究拟检测人HIF-1α对RORc的激活及对下游基因的影响，证明其对Th17细胞正调控，通过检测其对Foxp3蛋白的分解，证实对Treg细胞分化的抑制，从而验证人HIF-1α在Th17/Treg平衡中的调控作用。利用模拟胎盘微环境模型，结合FCS和ChIP 等技术，阐明胎盘微环境中HIF-1α调控Th17/Treg平衡在HBV宫内感染免疫耐受的分子机制，为临床早期诊治HBV宫内感染提供新的靶点。

免疫耐受是宫内感染HBV易慢性化的主要机制，但其细胞及分子机制尚未完全阐明。前期研究发现宫内感染是病毒和宿主相互异质性作用的结果，引导我们从机体免疫方面进一步探讨HBV宫内感染机制。有研究提示HBV孕妇母胎界面Th17/Treg极化失衡，而HIF-1α是参与调控小鼠该平衡的关键转录因子。故推测：胎盘微环境中HIF1α诱导Th17极化进而调控Th17/Treg平衡，导致HBV宫内感染的免疫耐受形成。本研究拟检测人HIF-1α对RORc的激活及对下游基因的影响，证明其对Th17细胞正调控，通过检测其对Foxp3蛋白的分解，证实对Treg细胞分化的抑制，从而验证人HIF-1α在Th17/Treg平衡中的调控作用。采用流式细胞术细胞内染色技术检测健康孕妇、合并HBV孕妇的外周血及脐血中Treg和Th17细胞比例，并计算Th17/Treg比值，共91例，组间各指标比较均未发现有统计学意义的差异，分析其与我们预期试验目标不一致的原因有二：1、进行流式检测的标本量不够，需进一步扩大样本量的收集；2、孕妇外周血与新生儿脐血的Treg和Th17细胞的占比，及其Th17/Treg比值的绝对值可能并不是HBV孕妇母胎界面Th17/Treg极化失衡的主要反应指标，因为胎盘的标本尚未进行具体检测，而且细胞极性模型的构建也非常困难。但在我们收集的2014.01.01至2018.12.31重庆医科大学附属第一医院产科42,524例分娩数据中，排除死胎、多胎及合并HCV、HIV感染等因素（累计3873例），最后在38,651例单活产的孕妇中合并HBsAg阳性者2309例，本中心的孕妇HBsAg阳性携带率5.97%；其中最有意义的发现为合并HBV感染的孕妇早产率降低，HBsAg阳性组的早产发生率显著下降(aOR, 0.737;95%CI, 0.549-0.991)，妊娠34-37周明显(aOR, 0.694;95%CI,0.488-0.986)。这个统计结果提示：HBV感染的孕妇因免疫耐受状态而抵消或降低早产的免疫应激状态，具体通过何种机制产生作用，目前尚不清楚，因COVID-19疫情延滞后续的研究，我们将继续后续试验。