基于NO/NF-κB信号偶联的民族药艳山姜调控血管内皮功能稳态机制研究

心血管疾病（CVD）是血管内皮功能长期损伤的结果，而炎性反应、氧化应激是导致内皮功能损伤的首要原因，早期防治尤为关键。课题组在前期发现艳山姜对血管内皮功能的调控作用与血管内皮依赖性相关的基础上，针对血管内皮功能损伤的关键环节，提出"整体多点调控'NO/NF-κB信号通路'是民族药艳山姜重构血管内皮功能稳态的重要机制"假说，应用LPS诱导血管内皮细胞炎症损伤模型，自发性高血压大鼠内皮损伤动物模型，采用GC/MS指纹图谱等现代分析手段，运用细胞电镜等形态学分析、相关生化酶学及RT-PCR、Western bloting等现代分子生物学技术，并通过主成分分析（PCA）等统计方法分析药效与化学信息相关性，多学科交叉结合，系统分析艳山姜挥发油对血管内皮功能的保护作用及其作用机制，为艳山姜特色药物资源的合理利用和系统研究开发提供一定科学依据，进一步发挥贵州民族医药防治心血管疾病的特色优势，指导临床。

血管内皮炎性损伤是CVD的共同病理过程，本研究主要围绕EOFAZ对“NO/NF-κB”信号的调控保护作用。.第I部分 艳山姜对LPS诱导的HUVECs损伤的.保护作用及机制研究.目的：考察EOFAZ对LPS诱导的HUVECs损伤的保护作用及机制。方法：实验分为6组：空白、模型、阳性、挥发油各剂量组。采用HE、Gimsa染色法观察细胞，MTT法和LDH外漏分析细胞损伤，检测相关细胞因子，检测炎症因子iNOS、NF-ΚB mRNA和蛋白表达。结果：LPS诱导细胞炎性损伤，EOFAZ干预后，存活率明显升高、LDH外漏减少。上清液NO、PGI2含量增加，TXA2、ET-1、AngⅡ、IL-1、IL-6降低。药物降低HUVECs iNOS表达，抑制NF-ΚB激活。结论：EOFAZ对LPS诱导的HUVECs具有保护作用，机制与抑制炎症反应密切相关。.第II部分 艳山姜对自发性高血压大鼠（SHR）血管内皮损伤的保护作用及机制研究.目的：考察EOFAZ对SHR大鼠血管内皮的保护作用及机制。方法：高脂饲料诱导SHR大鼠建立高脂、高血压血管内皮损伤模型，观察药物对大鼠动脉血压、脂质代谢、动脉粥样硬化指数、心脏指数及左心室肥厚指数的影响，HE、维多利亚蓝弹力纤维染色观察大鼠主动脉血管形态学变化。检测血管内皮iNOS、NF-ΚB的mRNA和蛋白表达。结果：EOFAZ确切降低大鼠血压、改善脂质代谢、改善心脏指数、减少炎症介质释放，有效降低炎症因子iNOS表达，抑制NF-ΚB激活。结论：艳山姜挥发油对高脂SHR大鼠血管内皮具有保护作用，其抗炎、改善脂质代谢、心功能为其主要作用机制。.第III部分 艳山姜挥发油有效成分物质基础初探.目的：初步分析EOFAZ主要活性组分。方法：将EOFAZ中α-蒎烯，β-蒎烯，1,8-桉叶油醇，莰烯作为考察因素，每个因素选取有或无2个水平，按L8 (27)正交表设计给药。以细胞活力和NO分泌量为指标分析药效物质基础。结果：正交试验显示4个成分均能明显提高细胞存活率，作用主次顺序为莰烯>α-蒎烯>1,8-桉叶油醇>β-蒎烯，其中前二者具显著性差异。单成分分析表明4个成分具有保护作用，且呈剂量相关性。结论：4成分为EOFAZ有效物质成分，其中莰烯，α-蒎烯为其主要药效组分。