参附方对药物代谢酶和转运蛋白的影响作用

Drug transporters and metabolism enzymes are the important factors in drug dynamic process in vivo, and they can also be induced or inhibited by the active ingredients of Shen-Fu-Tang, which might be principal mechanism of drug interaction. In the present study, the migration of constituents in the blood after administration Shen-Fu-Tang is screened using serum pharmacology, serum medicinal chemistry and liquid chromatography coupled with time-of-fight mass spectrometry, active constituents is determined by the results of pharmacodynamics and pharmacokinetics. The active constituents of Shen-Fu-Tang and its ingredients in serum is observed, which can be detected as substrates of drug transporters and metabolism enzymes. The effects of Shen-Fu-Tang and its ingredients on drug transporters and metabolism enzymes is explored at levels of enzyme activity, mRNA and protein expression. The induced or inhibited constituents in Shen-Fu-Tang drug transporters and metabolism enzymes is determined, and the subtype is investigated. The relationship of Shen-Fu-Tang on drug transporters and metabolism enzymes is summarized. The basis of components compatibility is interpreted by the drug interaction mechanism, which can be regarded as the guide of modern Chinese patent medicine

药物代谢酶和转运蛋白是决定药物体内过程的关健因素，它们的抑制或诱导作用是药物联合应用时产生相互作用的主要机制。课题采用血清药物化学、血清药理学、液相色谱-质谱联用技术分析参附方及其配伍给药后血清药物成分的体内过程，与药效学研究相结合，确定参附方作用的药效物质。进而分析参附方药材、部位、组分、成分等层次配伍对血中有效成分质和量的影响，发现和确定药物代谢酶和转运蛋白的可能底物。进而在mRNA、蛋白表达及酶活性水平，确定参附方药材、部位、组分、成分等层次配伍对药物代谢酶和转运蛋白的调控作用，发现和确证对药物代谢酶和转运蛋白有诱导或抑制作用的化学成分，探索对药物代谢酶和转运蛋白作用的具体亚型，进而总结配伍对代谢酶和转运蛋白作用的相关性，在药物相互作用机制上实现对参附方复方配伍的科学解释, 并应用于指导组成具有现代科学依据的新方剂。

药物代谢酶和转运蛋白是决定药物体内过程的关健因素，在全方、配伍、单味中药三个层次，从体内、外两个方面，探讨参附配伍对乌头类生物碱和人参皂苷的影响，进而基于药物代谢酶和转运蛋白构建了参附配伍减毒研究的新模式，并考察参附配伍对心脏作用的影响，发现了参附作用的新靶点CYP2J3。.参附配伍减毒的物质基础：人参附子药对配伍应用时双酯型二萜生物碱的含量明显降低，而单酯型二萜生物碱的含量明显升高。参附配伍在血清中未检测到剧毒双酯型生物碱，单酯型以及其他类型的生物碱吸收增加。. 参附方与药物代谢酶之间的相互作用：HPLC结合代谢抑制实验显示参与乌头碱代谢的P450亚酶为CYP3A和CYP1A2，在参与乌头碱的代谢过程中，CYP3A起主导作用，其次为CYP1A2。人参皂苷Rc、Rf、Rb2、Rg2、F2、F1、Re对PXR-CYP3A4通路有显著激活作用。 . 参附方与转运蛋白之间的相互作用：人参通过诱导P-gp来增加附子中双酯型毒性生物碱的外排，同时对其他低毒或无毒标志性生物碱成分无明显影响。. 参附配伍对心脏的影响：人参可以显著诱导心脏中以CYP2C11和2J3代表的表氧化酶，使EETs生成量增加。人参与附子配伍可以减轻附子的心脏毒性，柠檬酸、谷胱甘肽、磷脂酰胆碱、尿酸可作为附子造成心脏毒性的潜在标记物。患者低密度脂蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、磷酸肌酸激酶水平升高，参附注射液使心肌紊乱的能量代谢尤其是脂肪类的代谢得到恢复。附子对心肌细胞具有一定的线粒体毒性，主要机制为线粒体ATP生成减少，产生过量的ROS 引起氧化应激，Ca2+超负荷，线粒体通透性转换孔持续性开放等。人参皂苷Re能够降低CaMKⅡ磷酸化水平，减轻乌头碱引起的心肌细胞Ca2+紊乱。乌头碱和次乌头碱可以活化自噬，人参皂苷Rb1可以抑制乌头碱引起的心肌细胞过度自噬并且可能通过PI3K-AKT-mTOR通路来实现。